[目的]TIN2是端粒保护蛋白复合体(Shelterin)中的关键一员,众多的研究表明Shelterin结构的改变,会引发端粒功能的紊乱,进而引发一系列的疾病。本研究在建立稳定的TIN2高表达和干扰TIN2表达的人胃黏膜上皮GES-1细胞系的基础上,来探讨TIN2的异常表达对人胃粘膜上皮GES-1细胞端粒及染色体的影响。[方法]建立稳定的TIN2高表达和干扰TIN2表达的人胃黏膜上皮GES-1细胞系。Southern blot实验检测端粒的平均长度。免疫荧光/端粒肽核酸荧光原位杂交(PNA-Fish)实验检测端粒DNA的损伤反应而引发的端粒功能障碍诱导损伤灶(TIFs),通过染色体分析观察TIN2的异常表达是否导致染色体畸变。采用染色质免疫共沉淀(Chip)检测在TIN2异常表达的GES-1细胞中TRF1、TRF2、POT1与端粒DNA的结合情况。[结果]1、成功的构建了稳定的TIN2高表达和干扰TIN2表达的人胃黏膜上皮GES-1细胞系。2、Southern blot实验结果表明,当TIN2高表达、低表达时,GES-1细胞的端粒的平均长度变短,与TIN2低表达的GES-1细胞相比,TIN2高表达的GES-1细胞的端粒平均长度更短。3、PNA-Fish实验发现TIN2高表达的GES-1细胞中出现了多于2个TIFs,干扰TIN2表达的GES-1细胞中偶见TIFs。通过统计学分析,发现TIN2高表达和TIN2低表达的GES-1细胞中出现的TIFs与其他对照组相比增多,差异具有统计学意义(P<0.05)。与TIN2低表达的GES-1细胞相比,TIN2高表达的GES-1细胞TIFs增加得更加明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。4、通过染色体分析发现TIN2高表达和低表达的均可导致GES-1细胞染色体畸变,与TIN2低表达的GES-1细胞相比,TIN2高表达的GES-1细胞导致更多的染色体畸变,差异具有统计学意义(P<0.05)。5、Chip实验的结果表明当TIN2高表达和干扰TIN2的表达时,TRF1、TRF2与端粒DNA的结合能力减弱。TIN2高表达时,TRF2与端粒DNA的结合能力较干扰TIN2表达时降低得更加明显,且差异具有统计学意义(P<0.05)。当TIN2高表达时,POT1与端粒DNA的结合能力降低,与其他对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]在人胃黏膜上皮GES-1细胞中,TIN2高表达、低表达均导致端粒的平均长度缩短和端粒功能障碍诱导损伤灶,及染色体畸变,其高表达作用更加显著。结果提示TIN2的异常表达可能在胃癌的发生中起着一定的作用。