NMBR介导妊娠子宫平滑肌细胞中AP-1与NF-κB相互作用的研究

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jyj910
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:探索神经调节素B (Neuromedin B, NMB)—神经调节素B受体(Neuromedin B receptor, NMBR)作用的妊娠晚期人子宫下段平滑肌细胞内核转录因子(Nuclear factor kappa B, NF-κB)与激活蛋白-1(Activator protein1, AP-1)是否存在相互作用。方法:1.通过组织块培养法获得妊娠晚期人子宫平滑肌原代培养细胞,借助免疫细胞化学方法对细胞进行鉴定并检测细胞内NMBR表达。2.以10-6M、10-8M、10-10M浓度NMB分别诱导子宫平滑肌细胞48小时后,蛋白免疫印迹法(Western blotting, WB)检测AP-1与NF-κB蛋白在各组中的表达。分别使用anti-NF-κB p65抗体和anti-c-Jun抗体分别行免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, co-IP),后联合WB技术,正、反验证co-IP沉淀下来的复合物中分别存在AP-1和NF-κB蛋白。3.以NMB最佳诱导浓度分别诱导子宫平滑肌细胞12h、24h及48h。WB检测AP-1与NF-κB蛋白在各组中的表达,同理使用anti-NF-KB p65抗体和anti-c-Jun抗体分别行免疫共沉淀,正、反验证两蛋白间存在相互作用。结果:1.获得妊娠晚期人子宫下段平滑肌原代培养细胞,至少可以传5代,经α-SMA鉴定为高纯度子宫平滑肌细胞,且证实细胞内NMBR表达阳性。2.以10-6M、10-8M、10-10M浓度NMB诱导子宫平滑肌细胞48h后,anti-NF-κB p65抗体行免疫共沉淀,沉淀复合物以anti-c-Jun抗体作为一抗行WB鉴定,分子量36KD处出现条带;同理,经anti-c-Jun抗体富集下来的免疫共沉淀复合物,使用anti-NF-κB p65抗体作为一抗行WB鉴定,分子量65KD处出现条带。且于NMB诱导浓度为10-10M时,对应目的条带灰度值高于其它诱导浓度条带灰度值。3.以1010MNMB诱导子宫平滑肌细胞12h、24h及48h,正反验证anti-NF-κB p65/anti-c-Jun抗体富集下来的免疫共沉淀复合物,WB检测分子量36KD/65KD均有条带出现。且于NMB诱导时间为24h时,对应目的条带灰度值高于其它诱导时间条带灰度值。结论:NMB-NMBR作用的人妊娠晚期子宫下段平滑肌细胞中存在AP-1与NF-κB相互作用,且以10-1MNMB作用24h时,二者相互作用最强。
其他文献
许多年前,我大约六七岁时,就暗暗告诫自己:长大后,一定要亲手给舅舅做一顿饭。  那时不知道有宫爆大虾、干煸仔鸡、豉椒蒸排骨、红烧茄子、三鲜豆腐这些菜名,也不知道有川菜、粤菜、湘菜、苏菜等八大菜系,我只是想用自家地里长的海椒、牛皮菜、蘿卜、豇豆、南瓜、茄子、蒜苗等,在自家的大铁锅里,亲手给舅舅炒几个菜,做一顿饭。尽管没有菜名,不入菜系,或许还做得没有章法,但只要有盐有味就行。我要亲手端到舅舅面前,陪
期刊
目的:   后发性白内障(posteriorcapsuleopacification,PCO)是导致患者术后视力下降的最主要并发症。尽管手术或激光后囊切开是一种较为有效的治疗方法,但存在一定的缺陷
八十七年前,后来翻译了显克微支《你往何处去》、霍桑《红字》的翻译家侍桁,以批评家的身份写了一篇《文坛上的新人》的评介文章,将沙汀、艾芜、臧克家等五人称为“1933年的
期刊
研究目的:研究SARS康复患者在流行期过后的社会心理特征及发展趋势,了解其中PTSD的发生率,比较PTSD与非PTSD患者在各相关因素上的差异,发现其中对PTSD有预测意义的因素.通过
目的 以阵发性房颤患者为研究对象,研究右心房不同部位的心房波振幅变化特点,比较心房颤动时f波振幅与窦性心律下A波振幅的相关变化,探讨在房颤律状态下起搏器心房电极固定位置
目的探讨Tc-MIBI功能显像在评估肺癌MDR及预测化疗疗效中的作用,用以指导临床化疗.方法40例Ⅲ~Ⅳ期肺癌患者接受2周期诺维本或健择联合顺铂方案的化疗,化疗结束4周后复查胸部