点阵CO2激光治疗兔耳增生性瘢痕后成纤维细胞凋亡及VEGF变化规律的研究

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目的:1.通过点阵CO2激光对兔耳增生性瘢痕治疗的实验研究,验证点阵CO2激光治疗增生性瘢痕的有效性;2.观察点阵CO2激光治疗兔耳增生性瘢痕后各时期瘢痕中成纤维细胞凋亡及VEGF表达情况的变化,为治疗的有效性提供理论依据。方法:1.新西兰大白兔20只制作兔耳增生性瘢痕的动物模型。兔双耳腹侧局麻下每侧作5个直径为1cm的正方形切口,切口间距1cm,完整切除皮肤全层及软骨膜,保留软骨。创面予暴露、每日络合碘换药一次。三周内创面上皮化形成增生性瘢痕。2.随机将一侧耳设定为点阵CO2激光治疗组,对侧设定为空白对照组。造模后三周治疗组行点阵CO2激光治疗(DeepFX,能量20.0mJ频率300Hz,Shape:2,Size:10,Pulses:2,Density:5%),对照组无任何干预。治疗后创面不予特殊处理。3.对照组、治疗组切取治疗后1小时、治疗后3天、7天、14天、28天瘢痕组织,行HE染色观察各组各时期镜下成纤维细胞形态、密度,毛细血管增生情况及胶原纤维排列,TUNEL法检测成纤维细胞凋亡率变化,免疫组化检测VEGF的表达变化。结果:20只新西兰大白兔实验过程中5只因死亡退出实验,余15只兔完成全部实验过程,其中两只兔造模及分组治疗后不予切除瘢痕标本行相关检测。三周内创面痂皮全部脱落(上皮化)并逐渐形成突出于正常皮肤的红色增生性瘢痕。1.大体观察:点阵CO2激光治疗组较对照组瘢痕自治疗后一周时间左右色泽变淡,突出皮面的增生块软化、变平,点阵CO2激光治疗组瘢痕软化、完全平坦所需时间是50.90±2.28天,对照组所需时间是69.00±2.10天。2. HE染色组织学观察:增生性瘢痕镜下显示瘢痕最厚部位为周边正常皮肤厚度的3-4倍,主要是大量的成纤维细胞及不规则排列的胶原,其间见毛细血管及炎性细胞,结构近似人类的增生性瘢痕。从治疗后14天开始,经点阵CO2激光治疗的瘢痕组织较同期对照组瘢痕中成纤维细胞明显减少,胶原排列有序,毛细血管数量减少。3. TUNEL检测成纤维细胞凋亡:对照组在瘢痕形成的早期,仅有少量凋亡细胞,随时间推移凋亡细胞逐渐增加;治疗组治疗后即刻即可在柱状损伤带周围观察到成纤维细胞凋亡增多现象,治疗组治疗后1小时、治疗后3天、7天、14天、28天成纤维细胞凋亡率逐渐增高,各时期凋亡率均比同期对照组高(P<0.05),差异有统计学意义。4.血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化:点阵CO2激光治疗后7天、14天、28天瘢痕中的VEGF阳性颗粒表达水平逐渐降低,与同期对照组比较明显降低(P<0.05),差异有统计学意义,而对照组VEGF阳性颗粒表达水平在上皮化后28天时才开始显著降低。结论:1.点阵CO2激光治疗可以促进兔耳增生性瘢痕软化、变平。2.点阵CO2激光治疗兔耳增生性瘢痕后使瘢痕组织中成纤维细胞凋亡增加、VEGF的表达降低。3.点阵CO2激光治疗增生性瘢痕的机理之一可能在于其启动了增生性瘢痕中过度增殖的成纤维细胞的凋亡程序,加速过度增殖的成纤维细胞凋亡,进而影响VEGF的表达,促进瘢痕的萎缩,达到治疗的目的。
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