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目的先天性巨结肠症(Hirschsprung’s disease,HSCR)又称“肠壁无神经节细胞症”,是由遗传、环境等多种因素共同作用导致肠神经系统(Enteric nervous system,ENS)早期发生多基因突变或表达异常的神经嵴细胞源性的一种先天性肠道疾病。其基本病理生理改变为远端病变结肠黏膜下神经丛(Submucosal plexuses)和肌间神经丛(Myenteric plexuses)内完全或部分缺乏肠神经节细胞(Intestinal ganglion cells,IGCS),致使神经纤维排列紊乱,呈波浪状,造成结肠持续痉挛,失去正常的推进蠕动功能。由于粪便通过困难,长期淤积于痉挛肠段,近端结肠代偿性扩张、增厚,形成巨结肠。ENS是一个复杂而积极的胃肠道动力和感觉神经系统,由肠道肌间和黏膜下神经丛共同构成,两者之间紧密联系,对胃肠道的运动、分泌功能具有独立的调节作用。HSCR是ENS早期发生基因突变或功能丧失的结果。神经降压素(neurotensin,NT)是由肠道具有特殊内分泌功能的开放型的N细胞分泌的一种神经递质或调质,属于配体依赖性的转录因子,在中枢神经系统(Central nervous system,CNS)以及心血管、呼吸、消化、内分泌、免疫等多种外周系统中存在并发挥重要的功能调节作用。神经降压素受体1(Neurotensin receptor 1,NTSR1)是一种具有7个跨膜结构域的G蛋白偶联受体,在人体结肠中与NT配基亲和力最高。NT通过介导G蛋白偶联受体NTSR1激活相应的信号通路,产生向下的信号传递,到达胃肠道平滑肌等效应部位,从而增强结肠的推进运动,使粪便排空。NTSR1在ENS中对肠道动力具有十分重要的作用。在我们的前期研究中,利用基因芯片技术检测出大量的HSCR差异性表达基因,其中ntsr1基因表达明显下调,并经rt-pcr验证。查阅相关文献,目前国内外在nt-ntsr1的相互作用与hscr发病的相关关系方面研究较少。有研究已发现,ntsr1在人体正常结肠组织黏膜下和肌间神经丛存在不同程度的阳性表达,而ntsr1在hscr各肠段是否表达并存在表达的异常尚不清楚。因此,本研究从前期研究结果中选取ntsr1基因,采用免疫组织化学染色法观察ntsr1在hscr各段肠壁肌间神经丛的表达情况,从而初步探讨ntsr1与hscr发病的可能关系。方法选取2010年1月至2014年9月在广东省妇幼保健院小儿外科经肛门巨结肠根治术治疗的hscr患儿手术标本42例作为实验组,实验组分为狭窄段、移行段、扩张段、正常段四个组别。所有患儿均为首次接受手术治疗,均为散发病例,无合并其他主要脏器的先天性畸形或综合症,近系亲属均无hscr病例。所有患儿均根据术前临床表现、钡剂灌肠造影等检查,以及术中快速冰冻病理及术后病理科医师二次he染色诊断结果综合确诊。所选取病例符合正态分布的原则。选取与实验组年龄相近的如先天性无肛门、结肠穿孔、乙状结肠冗长症等非hscr患儿手术切除的正常结肠标本20例作为对照组,对照组家族中无hscr病例及其它肠神经发育异常性疾病。在光学显微镜下观察实验组与对照组病例he染色的结果并统计。应用免疫组织化学染色法检测42例实验组标本狭窄段、移行段、扩张段、正常段及20例正常对照组标本肠壁肌间神经丛中ntsr1的表达,光镜下观察并统计其阳性表达情况,并与he染色结果进行对比。同时应用计算机图像分析软件(image-proplus6.0)计算ntsr1在实验组及对照组各段肠壁肌间神经丛中免疫组化阳性染色的平均光密度(mod)并将结果进行定量分析,将所得数据用spss13.0统计软件进行处理分析,判定差别是否存在意义。结果1.he染色:狭窄段肌间神经丛中未见神经节细胞,神经纤维较扩张段明显增粗、排列紊乱。从狭窄段到正常段肠壁肌间神经丛中,神经节细胞的分布逐渐增多,变性神经纤维的分布逐渐减少。2.在hscr实验组正常段及对照组肌间神经丛中,可见ntsr1强阳性表达的神经纤维;在扩张段,强阳性表达的神经纤维较实验组正常段和对照组有所减少;在移行段,可见散在弱阳性到中等强度阳性表达的神经纤维;在狭窄段,可见少量弱阳性表达的神经纤维,肌间神经丛总体表达呈弱阳性或阴性。3.ntsr1在hscr各段肠壁平滑肌中呈弱阳性到中等强度阳性表达,其中环形肌的总体表达强度高于纵形肌。4.定量分析:ntsr1在hscr实验组狭窄段、移行段、扩张段、正常段及对照组肌间神经丛中阳性表达的平均光密度分别为8.39±2.68、11.76±6.79、17.14±12.26、21.92±14.68、23.45±19.82,经统计软件分析,与移行段、扩张段、正常段及对照组肠壁肌间神经丛相比,狭窄段平均光密度明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);移行段与扩张段、移行段与正常段、移行段与对照组、扩张段与正常段、扩张段与对照组、正常段与对照组各间的平均光密度相比,没有明显差异(P>0.05)。结论1.狭窄段肠壁肌间神经丛中NTSR1表达明显降低,其表达异常可能是导致HSCR肠蠕动功能障碍的重要原因之一。2.免疫组化显示NTSR1在HSCR的狭窄段肠壁肌间神经丛大多表达阴性,少部分表达呈弱阳性,这对活检诊断HSCR有一定的帮助。NTSR1有望作为筛选诊断HSCR的一种敏感有效的神经标志物。