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研究背景与目的慢加急性乙型肝炎肝衰竭(acute-on-chronic hepatitis B liver failure, ACHBLF)病死率高,严重危害人类健康。最近的研究表明,促炎细胞因子在ACHBLF的发生和发展过程中发挥着十分重要的作用。有研究证明,过氧化物酶体增殖物激活受体y(peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPAR-γ)参与抗炎反应,但其在ACHBLF中发挥的作用仍不明确。因此,本研究旨在通过检测PPAR-γ基因启动子甲基化及表达水平,揭示PPAR-γ在ACHBLF发生发展中的作用及其预测ACHBLF短期预后的潜在临床应用价值。研究方法本研究共纳入了161例受试者,包括81例ACHBLF患者,50例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者,以及30例健康对照者。用实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR)法检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中PPAR-γ的mRNA水平；用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR, MSP)检测PPAR-γ基因启动子甲基化情况；用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血浆中TNF-α和IL-6的水平。应用SPSS V17.0软件进行统计学相关分析,两组之间差异比较采用两独立样本t检验,Mann-Whitney U检验或卡方检验,PPAR-γ表达水平与临床资料的相关性分析采用Spearman相关分析。P<0.05认为有统计学意义。结果1.ACHBLF患者PPAR-γ mRNA水平与CHB患者相比显著升高(Z=-4.003,P<0.001)。然而,ACHBLF患者PPAR-γ mRNA水平仍显著低于健康对照组(Z=-4.632,P<0.001)。同时,CHB患者中PPAR-γ表达水平显著低于健康对照组(Z=-6.037,P<0.001)。2.对ACHBLF患者PPAR-γ mRNA水平与临床指标进行线性相关分析结果显示,PPAR-γ的表达水平与总胆红素(total bilirubin, TBIL)(r=-0.280,P=0.011)及国际标准化比值(international normalized ratio,INR)(r=-0.230,P=0.039)呈显著负相关。ACHBLF患者PPAR-γ mRNA水平与谷丙转氨酶(alanine aminotranferase,ALT).血肌酐(creatinine,Cr)及乙型肝炎病毒DNA(hepatitis B virUs-DNA,HBV-DNA)载量之间未发现显著相关关系。3.ACHBLF患者中PPAR-γ启动子的甲基化率比CHB患者显著降低(CpG-1,x2=8.918,P=0.003；CpG-2,x2=9.268,P=0.002),而仍然高于健康对照组(CpG-1,x2=6.691,P=0.009；CpG.2,x2=5.050,P=0.025).同时,CHB患者两个CpG岛的甲基化率均明显高于健康对照组(CpG-1,X2= 21.333,P<0.001；CpG-2,x2=19.448,P<0.001).4.对所有受试者甲基化组与非甲基化组的PPAR-γ mRNA水平进行比较。结果显示,在CpG-1或CpG-2发生甲基化的情况下,PPAR-γ的相对表达量将显著减少(CpG-1,Z=-6.613,P<0.001；CpG-2,Z=-7.712, P<0.001),并且当CpG-1及CpG-2同时发生甲基化时对PPAR-γ的表达抑制效果增强(Z=-4.085,P<0.001)。5.受试者的血浆TNF-α和IL-6水平通过酶联免疫吸附试验测定。ACHBLF患者中两种细胞因子水平均显著高于CHB患者(TNF-α, t=6.649,P<0.001；IL一6,t=6.784,P<0.001)和健康对照组(TNFα,t=5.582, P<0.001；IL-6,t=5.961,P<0.001).ACHBLF患者中甲基化组的血浆细胞因子水平显著高于非甲基化组(TNF-α,t=2.312,P=0.023；IL-6,t=2.639, P=0.012).6.ACHBLF患者3个月的死亡率为54.32%(44/81),平均生存时间为53.47天(SE 4.057,95％CI 45.39-61.54).存活组的PPAR-γ mRNA水平显著高于死亡组(Z=-3.489,P<0.001)。ACHBLF患者甲基化组的预后显著差于非甲基化组(χ2=11.140,P<0.001)。ACHBLF存活组PPAR-γ表达水平随时间延长而显著增加,而死亡组维持于较低水平。我们评估了PPAR-γ mRNA水平、PPAR-γ启动子甲基化对预测ACHBLF短期预后的价值。ROC曲线下面积分别为0.726(SE 0.059,95% CI 0.611-0.841), 0.657(SE 0.062,95％CI 0.535-1.778).结论ACHBLF患者与CHB患者相比PPAR-γ表达水平升高,启动子甲基化率降低。PPAR-γ的表达水平及启动子甲基化状态与ACHBLF的严重程度和预后密切相关。并且,PPAR-γ可能通过下调TNF-α和IL-6,对于改善ACHBLF预后具有潜在意义,PPAR-γ的启动子甲基化状态及表达水平对于预测ACHBLF的短期预后具有重要价值。