【摘 要】
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目的:①探讨大鼠胚胎神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)体外分离纯化、扩增、冷冻保存、5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记、诱导分化及其特征鉴定的方法。②以儿童骨髓间质干细胞(
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目的:①探讨大鼠胚胎神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)体外分离纯化、扩增、冷冻保存、5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记、诱导分化及其特征鉴定的方法。②以儿童骨髓间质干细胞(bone marrow stromal cells/bone mesenchymal stem cell,BMSCs)为来源途径,探讨在一定条件下诱导其分化为神经干细胞及神经细胞的方法并对其生物学特征加以初步探索。为将来进一步研究NSCs、BMSCs的生物学特性或探索治疗脊髓栓系综合征及其它神经系统疾病动物模型提供证据和种子细胞。方法:①将14.5d胎龄大鼠大脑额叶皮质NSCs在无血清DMEM/F12(含20ng/mL bFGF,20ng/mL EGF及B27辅助培养液)培养,利用有限稀释法将悬浮生长的单个细胞所形成的克隆球挑选出来、通过亚克隆连续传代大量扩增的方法进行纯化;选取部分NSCs冻存、复苏并用BrdU孵育,用血清或饲养层细胞加以诱导NSCs,采用免疫组化的方法鉴定神经组织细胞特异性抗原的表达。②将儿童骨髓分离的BMSCs在α-MEM培养基(含20%胎牛血清,2mM谷氨酰胺,100U/ml盘尼西林,100mg/ml链霉素,25ng/ml两性霉素B)中进行无分化培养,诱导前24h加10ng/ml碱性成纤维生长因子(bFGF)入培养液中以促分裂,改换预诱导液(DMEM+20%FBS+ImM 2-巯基乙醇)培养24 h后弃去预诱导液,然后加入含丁羟茴醚(Burylated Hydroxyanisole,BHA)作诱导剂的诱导液(组成成分为DMEM+2%DMSO+150μM BHA)进行定向诱导分化培养,逐日观察细胞形态变化,并采用免疫组织化学技术对诱导后的
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