食道癌是一种常见的恶性肿瘤。化学疗法是治疗食道癌的常规手段。但是,肿瘤细胞的抗药性,化疗药物的无差别杀伤性以及化疗药物的各种毒副作用会加速疾病的发展。因此,寻找一种安全且对食道癌细胞无耐药性的新型药物迫在眉睫。家蚕抗菌肽(Bombyx mori Antibacterial peptides,Bm AMPs)是家蚕先天免疫系统中一类极其重要的免疫效应因子,可杀死多种细菌和真菌。近年来的研究表明,某些Bm AMPs对多种肿瘤细胞具有强烈的抑制作用。本研究通过固相合成法获得家蚕抗菌肽BmCecA(Bombyx mori cecropin A)和BmCecD(Bombyx mori cecropin D),通过体外实验探究其对两种食道癌细胞Eca109、TE13的抑制作用,并对其抑制机制进行了初步的探索;成功构建了食道癌细胞Eca109的荷瘤鼠模型,通过体内抑制实验确定BmCecA体内抑制食道癌的能力,并对其生物安全性进行评价;通过与姜黄素的联用,探究BmCecA和BmCecD的协同作用。前期预实验中,采用细胞增殖实验在固相合成法获得的家蚕抗菌肽中筛选出对食道癌细胞具有抑制活性的两种家蚕抗菌肽BmCecA和BmCecD。本研究利用增殖实验、克隆形成实验、划痕迁移实验以及侵袭实验探究BmCecA和BmCecD在体外对食道癌细胞Eca109以及TE13的抑制作用。结果显示,BmCecA和BmCecD在体外对两种食道癌细胞的增殖、克隆形成、迁移以及侵袭都有一定的抑制作用,并存在浓度依赖性,说明BmCecA和BmCecD在体外都能够有效影响两种食道癌细胞的活性。流式细胞仪检测BmCecA处理12 h后Eca109细胞的凋亡结果表明,随着BmCecA浓度的提高,Eca109细胞的凋亡率上升,说明BmCecA能够促进Eca109细胞的凋亡。利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)、Western-Blot进一步研究其作用机制,结果表明,BmCecA处理食道癌细胞后引起Bcl-2下调表达,Bax上调表达,增加了线粒体膜的通透性,使细胞色素C被释放进入细胞质中,从而激活caspase-3剪切生成cleaved Caspase-3,形成凋亡小体引起下游与细胞代谢相关的蛋白的降解,最终引起细胞凋亡。以上结果说明BmCecA通过激活线粒体介导的凋亡途径来抑制食道癌细胞。成功构建了食道癌细胞Eca109荷瘤鼠模型,并开展了体内抑制实验。通过瘤内注射BmCecA的方式对荷瘤鼠进行治疗,结果显示,BmCecA处理组能够影响小鼠肿瘤的生长但对小鼠的体重没有影响。对小鼠静脉注射BmCecA后,进行血液生化分析和主要器官组织化学分析,结果显示,血液中的各项指标与对照组相比没有显著差异,心脏、肝脏、脾脏、肺脏以及肾脏等主要器官在病理学上也都没有显著的改变。说明,在一定浓度范围内BmCecA有良好的生物安全性。通过与姜黄素的联用探索BmCecA和BmCecD的联合用药能力。将姜黄素分别与BmCecA、BmCecD联合用药处理Eca109细胞12 h,通过CCK-8分析其增殖抑制率,采用金氏公式的Q值来判断姜黄素与家蚕抗菌肽联用的作用效果。结果显示,与单独用药相比,联合用药组对两种食道癌细胞的增殖抑制作用增强,通过金氏公式可知增效指数Q均大于1.15,说明姜黄素与BmCecA或BmCecD联合用药为协同效应。本研究结果为今后深入研究家蚕抗菌肽的抗肿瘤机制、开发家蚕抗菌肽类抗肿瘤药物提供了有益的实验依据。