【摘 要】
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目的:探讨初级纤毛相关基因KIF3A通过Hedgehog对口腔鳞状细胞癌的作用机制。方法:人舌鳞癌TCA8113、CAL27细胞作为研究对象。预实验时分组为KIF3A-si RNA转染12小时组、KIF3A-si RNA转染24小时组、阴性对照12小时组、阴性对照24小时组和空白对照组,采用蛋白印迹法检测KIF3A的蛋白表达情况。采用MTT法检测细胞增殖观察各组增殖能力的变化;采用细胞划痕实验观察
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目的:探讨初级纤毛相关基因KIF3A通过Hedgehog对口腔鳞状细胞癌的作用机制。方法:人舌鳞癌TCA8113、CAL27细胞作为研究对象。预实验时分组为KIF3A-si RNA转染12小时组、KIF3A-si RNA转染24小时组、阴性对照12小时组、阴性对照24小时组和空白对照组,采用蛋白印迹法检测KIF3A的蛋白表达情况。采用MTT法检测细胞增殖观察各组增殖能力的变化;采用细胞划痕实验观察各组迁移能力的变化;采用免疫荧光实验在荧光显微镜下观察CAL27细胞中存在初级纤毛;采用蛋白印迹法检测KIF3A、Shh、Gli1蛋白表达水平;采用实时荧光定量实验检测各组KIF3A、Shh、Gli1 m RNA的相对表达水平。结果:1.免疫荧光染色实验结果:人舌鳞癌CAL27细胞进行饥饿处理24小时后,通过荧光显微镜下对Arl13b蛋白观察,发现该蛋白主要集中在纤毛的轴突部位,其形态符合初级纤毛细长的形态特征,证明CAL27细胞中存在初级纤毛。2.检测KIF3A-si RNA转染效率:人舌鳞癌TCA8113细胞转染12、24小时后,进行蛋白印迹实验,与空白对照组、阴性对照组比较,转染12小时后KIF3A的蛋白表达水平少量下降,转染24小时后KIF3A的蛋白表达水平明显下降（P＜0.05）。3.MTT法检测细胞增殖结果:人舌鳞癌TCA8113和CAL27细胞分别转染24小时后,分别培养24、48、72小时后与空白对照组相比较,增殖率明显抑制,（P＜0.01）。4.细胞划痕实验结果:人舌鳞癌TCA8113和CAL27细胞分别转染24小时后,继续培养24小时后划痕,分别在0、24、48、72小时后与空白对照组相比较,24小时后各组划痕内细胞迁移能力无统计学差异（P＞0.05）;48、72小时后划痕内细胞迁移能力与空白对照组比较明显抑制,具有统计学意义（P＜0.01）。5.蛋白免疫印迹实验结果:人舌鳞癌TCA8113和CAL27细胞分别转染24小时后,KIF3A、Shh及Gli1的蛋白表达水平均明显下降,各组与空白对照组相比均具有统计学意义（P＜0.05）。6.实时荧光定量实验结果:人舌鳞癌TCA8113和CAL27细胞分别转染24小时后,在TCA8113细胞中,KIF3A-si RNA转染24小时与空白对照组比较,KIF3A、Shh及Gli1 m RNA相对表达水平均明显下降,各组与空白对照组相比均具有统计学意义（P＜0.01）。在Cal27细胞中,KIF3A-si RNA转染24小时与空白对照组比较,KIF3A、Shh及Gli1 m RNA相对表达水平均下降,各组与空白对照组相比均具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.口腔鳞状细胞癌中存在初级纤毛。2.初级纤毛相关基因KIF3A可能通过调节Hedgehog影响口腔鳞状细胞癌的增殖、迁移能力。
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