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【目的】:研究COX-2抑制剂塞来昔布联合靶向药物索拉菲尼对肾癌细胞及其裸鼠移植瘤的治疗作用,观察联合用药的抑制肾肿瘤效果。【方法】:1.体外实验:(1)用蛋白免疫印迹(WB)实验验证索拉菲尼处理肾癌细胞后COX-2蛋白水平变化。为了研究COX-2表达在索拉菲尼杀伤肾癌细胞过程中的作用,通过特异性siRNA敲降肾癌细胞内COX-2的表达,用CCK-8和Annexin V-PI双染流式检测实验分别检测细胞活力和细胞凋亡,验证其对索拉菲尼杀伤肾癌细胞作用的影响;(2)采用不同浓度COX-2抑制剂塞来昔布与索拉菲尼单独及联合处理肾癌细胞,分为正常培养对照组、塞来昔布组、索拉菲尼组及联合用药组。CCK-8检测肾癌细胞的增殖活力,Annexin V-PI双染流式细胞术检测肾癌细胞凋亡的情况。2.体内实验:为了进一步验证药物联用的效果,我们采用人肾癌细胞株ACHN建立裸鼠移植瘤模型,成瘤后随机分组为阴性对照组、塞来昔布组、索拉菲尼组及联合用药组,给予小鼠相应药物治疗。每隔2日测量并记录用药后裸鼠肿瘤的大小变化,根据公式V=D(d~2)/2(V为瘤体体积,D为瘤体最长直径,d为瘤体最小直径)绘制肿瘤生长曲线。用免疫组化检测各组裸鼠移植瘤中Ki-67的表达情况。【结果】:1.体外实验:蛋白免疫印迹结果表明索拉菲尼处理能促进ACHN细胞中COX-2表达明显升高。采用siRNA干扰技术特异性敲降肾癌细胞中COX-2的表达后,索拉菲尼对肾癌细胞的杀伤作用明显增强。CCK-8法结果表明,不同浓度的塞来昔布与索拉菲尼处理肾癌细胞,肿瘤细胞生长受抑制程度随着药物浓度的增加而增强,联合用药对肾癌的抑制作用优于单独药物处理;流式细胞术结果表明,塞来昔布可以促进索拉菲尼诱导的肾癌细胞凋亡。2.体内实验:裸鼠移植瘤的生长曲线结果表明,塞来昔布组与索拉菲尼组及联合用药组裸鼠肿瘤体积均较对照组明显小,其中联合用药组裸鼠的肿瘤体积最小。免疫组化结果表明,塞来昔布组与索拉菲尼组及联合用药组裸鼠肿瘤中Ki-67的阳性细胞数和比例均较对照组低,其中联合用药组中裸鼠肿瘤的阳性细胞数和比例最低。【结论】:1.索拉菲尼可以促进肾肿瘤细胞COX-2的表达,通过抑制细胞COX-2的表达可以增强索拉菲尼对肾癌细胞杀伤作用。2.塞来昔布能有效促进索拉菲尼抑制肾癌细胞的增殖,诱导肿瘤细胞的凋亡的功能,联合用药具有协同抑制肾癌效果。