沙门氏菌是人畜共患病和公共卫生学研究领域公认的严重危害养殖业和公众健康的食源性病原菌,目前已有2600多种血清型被发现,众多的血清型均可导致各种动物及人感染,感染严重者还能致其死亡。沙门氏菌既可水平传播又能垂直传播,种蛋在沙门氏菌的散播及食品污染方面扮演重要角色。山东是养鸭大省,有研究提出近年来鸭胚死亡率明显升高,其中沙门氏菌感染是重要诱因。本研究旨在通过鸭胚源沙门氏菌分离鉴定,进一步评估沙门氏菌在鸭胚中的感染状况,明确沙门氏菌经卵垂直传播的感染地位;通过分离株的血清型分型,阐明分离株的血清型分布规律,并筛选地方鸭场沙门氏菌流行性优势血清型;通过分离株的基因型分型,探析各分离株间的遗传进化关系;通过对分离株毒力基因的检测,明确分离株毒力基因的检出率及各分离株携带的毒力基因数量;选择优势血清型菌株进行动物致病性试验,通过测定LD50,观察临床症状及病理组织学变化,阐明分离株的致病性及与毒力基因携带数量间的相关性。以上研究结果,为鸭源沙门氏菌的流行病学研究奠定基础和提供试验支撑材料,并为鸭场及种鸭孵化场的生物安全规范化提出建议。1.死亡鸭胚中沙门氏菌的分离鉴定本研究先后对来自山东省多个规模化种鸭场335枚无破损的死亡鸭胚,经沙门氏菌分离培养、形态染色、生化试验、PCR鉴定及血清型分型,结果表明共分得沙门氏菌60株,感染率为17.9%,优势血清型为科特布斯沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌。基因分型结果显示各菌株相似系数为41%-100%,共分为7种基因型。2.鸭胚源沙门氏菌毒力基因的检测与鉴定PCR技术对60株沙门氏菌的毒力岛、菌毛、肠毒素、质粒四大类共23种毒力基因的检测,结果显示,invA、sipC、sipA、sopA、ssaB、orf319、pipC、misL、stn携带率在100%;sseL、mgtC、sopB、spvB、sopE、pef、spvC、siiE、spvD检出率在60%以上;spvR、spvA、ssaR、rck、sefA平均检出率为40%,60株菌中对受试毒力基因的检出率为100%。通过对单个菌株毒力基因的检出率统计结果显示:单株菌至少携带14种,最多携带23种毒力基因,且所有分离株普遍携带多重毒力基因。3.鸭胚源沙门氏菌的致病性试验随机对选取的10株沙门氏菌分离株进行致死性试验,结果显示致死率在33%～100%。通过小鼠致病性试验分析致病力与分离株携带毒力基因数量间的相关性,选取鼠伤寒沙门氏菌SD04株和科特布斯沙门氏菌SD20株进行LD50的测定,SPF小鼠腹腔注射0.2mL/只、10~4～10~9CFU/mL的浓度,对照组以相同剂量腹腔注射PBS。并根据LD50的结果,选取合适浓度灌服小鼠,在攻菌后6h、12h、24h、48h、72h、96h分不同时间点,分别采集心、肝、脾、肺、肾及小肠组织制备病理切片,进行HE染色和免疫荧光检测。结果显示,SD04株LD50为1.26×10~5CFU/mL、SD20株LD50为1.86×10~8CFU/mL,感染小鼠初期出现被毛凌乱、精神沉郁等症状,剖检及病理切片可见小鼠各组织脏器有不同程度的出血、坏死等特征,试验组上述采集的组织器官内有沙门氏菌定植,对照组无明显的临床症状和组织学变化,也未发现沙门氏菌定植。本研究对种鸭场死亡鸭胚中的沙门氏菌进行分离鉴定,确定其血清型和分子分型,并对其沙门氏菌分离株进行毒力基因的检测及分析,表明山东省多个规模化种鸭场存在沙门氏菌感染,且沙门氏菌阳性率为17.9%,优势血清型以科特布斯沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌为主。沙门氏菌分离株的毒力基因携带率较高且主要集中在SPI上。致病性研究初步表明致病性与毒力基因的携带数量呈正相关。