目的:目前靶向PD-1/PD-L1通路的治疗性抗体有效率不高。作为抗肿瘤免疫的一个负性调控因子,TGF-β削弱抗PD-1/PD-L1的疗效,并促进免疫治疗耐药。通过阻断TGF-β提高抗PD-1/PD-L1的效果具有科学意义和临床转化价值。本部分探讨TGF-β和PD-L1双特异性抗体YM101的构建和抗肿瘤作用。方法:基于Check-BODYTM抗体平台,我们开发出一种抗TGF-β/PD-L1的双特异性抗体YM101。抗TGF-β端的活性通过Smad-荧光素酶报告实验来确定。抗PD-L1端的活性是通过T细胞活化实验测定的。我们使用EMT-6、CT26和3LL小鼠肿瘤模型来研究YM101在体内的抗肿瘤活性,利用转录组测序、免疫组织化学染色和流式细胞术来分析YM101对肿瘤微环境的影响。结果:YM101可以与TGF-β和PD-L1特异性结合。体外实验表明,YM101能有效拮抗TGF-β和PD-1/PD-L1通路的生物学效应。此外,体内实验表明YM101的抗肿瘤活性优于抗TGF-β和抗PD-L1单药。分子机制的研究表明,YM101增加了肿瘤浸润淋巴细胞和树突状细胞的数量和活性。这种正常化的肿瘤免疫微环境和增强的抗肿瘤免疫反应可能是YM101发挥抗肿瘤作用的主要机制。结论:本项研究表明,YM101可以同时阻断TGF-β和PD-L1信号通路。与抗TGF-β和PD-L1单药相比,YM101具有更为强大的抗肿瘤效果。目的:YM101在免疫排除型肿瘤中有效地增加了抗PD-L1的治疗效果。然而,在免疫荒漠型的肿瘤中,YM101的疗效欠佳。锰离子(Mn2+)被认为是一种天然的干扰素基因刺激因子（STING）激动剂,它可能增强肿瘤抗原的呈递,提高YM101的治疗效果。本部分重点探讨YM101联合锰离子在非炎性肿瘤中的抗肿瘤作用及机制。方法:本部分通过western blotting论证Mn2+对STING通路的影响。Mn2+联合YM101在体外的协同效应是通过混合淋巴细胞反应、CFSE稀释实验和细胞因子检测来确定的。此外,我们在CT26、EMT-6、H22和B16肿瘤模型中评估Mn2+联合YM101疗法的体内抗肿瘤效果,并且采用流式细胞术、转录组测序和免疫荧光染色来研究肿瘤微环境的改变。结果:Mn2+可以激活STING通路,促进树突状细胞的成熟。混合淋巴细胞反应结果显示,Mn2+能协同YM101促进T细胞活化。此外,在多个小鼠肿瘤模型中,相对于单药治疗,联合治疗具有更强大的抗肿瘤效果和更广泛的抗肿瘤谱。从机制上而言,Mn2+联合YM101策略同时调节了抗肿瘤免疫中的多种成分,推动了从非炎性到炎性肿瘤的转变。结论:Mn2+和YM101的联合方案具有协同的抗肿瘤作用。这种新型的联合策略有可能成为治疗炎性和非炎性肿瘤的通用方案。