论文部分内容阅读
背景与目的:互隔交链孢霉（Alternaria alternate）是污染食物和饲料最普遍的真菌之一。它广泛分布于泥土和植物里,包括谷物、蔬菜、水果以及田间作物。互隔交链孢霉能产生多种代谢毒素,其中主要包括以下几种:互隔交链孢酚（alternariol,AOH）、交链孢酚单甲醚（alternariol methyl ether,AME）、互隔交链孢霉素（altenuene,ALT）、细交链孢菌酮酸（tenuzonic acid,TA）和细格菌毒素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（altertoxinⅠ、Ⅱ、Ⅲ,ATXⅠ、ATXⅡ、ATXⅢ）。这些毒素对动植物的毒性早有许多报道,其在肿瘤病因学中的作用也被大多数学者所认同。研究表明,AOH对哺乳动物细胞具有细胞毒性及遗传毒性,并可导致DNA聚合酶β（DNA polymeraseβ,DNA polβ）的高表达。ALT也是互隔交链孢霉主要代谢毒素之一,目前对其细胞毒性研究还较少,其细胞毒性和对DNA polβ表达的影响还未见报道。DNA polβ是重要的DNA修复酶之一,其主要作用是参与碱基切除修复（BER）,该酶在整个细胞周期中低水平表达,表达过度增高可造成DNA损伤修复时的错配增加而造成遗传不稳定性。目前已在食管癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌等多种人类肿瘤组织中发现有DNA polβ基因的表达过度增高。因此,研究polβ在肿瘤发生发展过程中的作用具有重要的意义。本研究旨在探讨ALT对细胞的毒性作用及对DNA的损伤作用,并观察其对DNApolβ表达的影响,为研究互隔交链孢霉在肿瘤发生发展过程中的作用打下基础,也为肿瘤病因学研究提供一定的理论依据。方法:以AOH为阳性对照,用不同浓度的ALT处理NIH/3T3细胞,通过形态学观察来判定其毒性,MTT法测半数抑制率(IC50)和细胞生长曲线,流式细胞术（FCM）检测细胞周期的改变。单细胞凝胶电泳检测对DNA的损伤作用;用RT-PCR和western-blot方法分别从mRNA和蛋白水平上来检测其对polβ表达的影响。各组之间的比较采用单因素方差分析。均以α=0.05为显著性水准。结果:①ALT对NIH/3T3细胞生长有抑制作用,半数抑制率为76.4μmol/L,50μmol/L和100μmol/L的ALT染毒24h对NIH/3T3有明显的毒性,并出现形态学改变;以10.0,20.0,50.0μmol/L的ALT染毒24h后,与对照组比较,G2/M期细胞比例增加,且差异有统计学意义（P＜0.05）。②10.0,20.0,50.0μmol/L的ALT单细胞电泳DNA尾长分别为19.57±7.74,30.82±7.38,37.94±8.77,拖尾率分别为37%,75%,88%,尾部DNA含量分别是19.5±7.74%,30.82±7.38%,37.94±8.77%,且与对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）。③10.0μmol/L和20.0μmol/L的ALT可引起DNA polβ在mRNA水平和蛋白水平的表达增高（P＜0.05）。结论:一定浓度的ALT对NIH/3T3细胞具有细胞毒性和DNA损伤作用,可使细胞周期发生阻滞,并增加DNA polβ的表达。