DRD1(dopamine receptorD1)是多巴胺受体的一种，是由七个跨膜区域(7-GM)组成的G蛋白偶联受体。DRD1广泛分布于神经系统，特别是尾壳核(Cpu)，伏隔核(Act)，视束(OT)，脑皮层(Cx)和杏仁核。DRD1通过正调控cAMP，激活蛋白激酶A，从而激活下游信号通路和细胞膜离子通道。研究表明DRD1在神经前体细胞的增殖与分化中发挥重要作用，另外DRD1受体的表达异常与药物成瘾，帕金森综合症等多种神经系统疾病有密切关系。　　 HuD是ELAVL(embryoluc lethal abnormal visuallike)/Hu家族中的一员，在神经系统中特异表达。HuD通过其蛋白含有的三个RRM结构域识别和结合靶mRNA39UTR中的ARE元件，增加靶mRNA稳定性，引导靶mRNA胞内运输和调控靶mRNA翻译。HuD在神经突起的生长与修复，神经干细胞和神经前体细胞的细胞周期调控等方面发挥重要作用。HuD表达异常与多种神经系统疾病相关。　　 ARE元件是一种重要的顺式作用元件，富含A和U，参与介导mRNA的降解。Tala等人在ARED3.0数据库中汇集了所有NCBI收录的mRNA3UTR上含有ARE元件的基因。通过检索ARED3.0数据库，我们发现DRD1mRNA的3UTR上具有一个进化保守的ARE元件。通过Real-timePCR实验，我们发现RA诱导后向神经元方向分化的P19细胞中DRD1和HuD呈同时上升的趋势，这提示我们HuD有可能识别DRD1mRNA3UTR的ARE元件，并由此调控DRD1基因的表达。　　 我们首先应用RNA-chip方法进行了检测。利用HuD抗体在P19细胞全蛋白裂解液中捕获HuD蛋白-RNA复合体，然后通过链霉亲和素珠从细胞全蛋白裂解液中分离纯化出抗体-HuD蛋白-RNA复合体。经过酚氯仿抽提出其中的RNA后，通过逆转录得到相应的cDNA，最后利用特异性引物通过PCR扩增出特异条带。发现在P19细胞中HuD蛋白结合DRD1mRNA。随后通过REMSA实验，证实HuD蛋白识别并结合DRD1mRNA3UTR上的ARE元件。说明HuD通过识别和结合DRDlmRNA3UTR上的ARE元件来实现对DRD1mRNA的调控。　　 通过荧光素酶报告实验，我们发现HuD蛋白能够上调DRD1基因的表达。将野生型DRD13UTR序列插入报告质粒荧光素酶基因编码区下游，用报告基因重组质粒和HuD真核瞬时表达载体共同转染293ET细胞，我们发现与转染空质粒的对照组相比，带有野生型DRD13UTR序列的荧光报告素酶活性有明显的上升。Real-timePCR实验表明过表达HuD蛋白后，含有野生型DRD13UTR的荧光报告素酶转录本数量明显高于对照组。在P19细胞中过表达HuD蛋白后，Real-timePCR实验表明DRD1mRNA也出现了上升。这说明HuD蛋白识别和结合靶基因mRNA3UTR的ARE元件后增加DRD1mRNA的稳定性，从而促使靶基因表达上调。　　 最后我们还发现HuD蛋白影响miR-504对DRD1的上调作用。受到W。Huang等在HEK293细胞中观察到has-miR-504可以上调人源DRD1表达的报道的提示，我们在293ET细胞中观察到过表达mmu-miR-504可以上调小鼠源DRD1的表达。我们将miR-504瞬时表达载体和带有DRD13UTR的荧光报告素酶表达质粒共同转染293ET细胞，24小时后荧光报告素酶表达出现显著上升；而如果将HuD瞬时表达载体与前二者同时转染293ET细胞，24小时后荧光报告素酶的上调程度会受到明显抑制。这是第一次发现HuD对靶基因的调控涉及miRNA。　　 综上所述，我们发现DRDI3UTR上的ARE元件能够被HuD蛋白识别和结合，从而增加DRD1mRNA的稳定性，提高DRD1在细胞中的表达。另外，miR-504可能影响HuD蛋白对于DRD1的表达调控。