论文部分内容阅读
【研究背景】脑胶质瘤起源于神经上皮细胞,是最常见的颅内原发性肿瘤,在给予手术加放化疗等综合治疗手段后,其预后仍然较差。SHP2是一种非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶,能够通过多种信号通路途径调控细胞的增殖、迁移和侵袭能力。早前研究报道青少年粒单细胞白血病患者中有35%发生SHP2基因突变,随后在一些实体瘤中也发现了突变型的SHP2。SHP2激活突变对血液肿瘤及实体瘤的发生发展及预后起着重要作用。临床上,在胶质母细胞瘤病人中发现了SHP2的突变体,但其对胶质瘤的影响及作用机制罕见报道。ERK1/2(细胞外信号调节激酶1/2)参与的RAS/ERK信号通路是细胞中最重要的信号转导途径之一,广泛参与调节细胞基本生命活动,例如增殖,存活和分化等。cAMP反应元件结合蛋白(CREB)是一种真核生物细胞核内调控因子,调控着广泛的基因的表达,它的磷酸化状态可使其活性增强百倍。研究表明,CREB的过度激活与白血病,非小细胞肺癌,胰腺癌和胶质细胞瘤等多种肿瘤的发生发展息息相关。基于以上研究背景,我们提出疑问:激活突变SHP2对神经胶质瘤细胞有何影响?ERK/CREB信号通路是否参与调节其过程?【研究方法】1.在胶质母细胞瘤细胞系A172和U87中建立SHP2空载(vector),野生型(WT-SHP2),激活突变型(MT-SHP2)稳转细胞株,检测SHP2表达并进行相关细胞行为学实验(增殖实验:MTT,平板克隆,软琼脂集落形成,流式细胞术;迁移和侵袭实验:Transwell实验);2.Western blot检测各组A172和U87稳转细胞株中ERK/CREB通路激活情况及相关蛋白表达;3.裸鼠成瘤实验中接种正常,空载,野生型,突变型的U87细胞于裸鼠腋窝皮下,饲养于SPF级动物房,定期记录肿瘤生长情况并做统计分析并对不同组的肿瘤进行免疫组化分析;4.采用ERK特异性抑制剂U0126处理野生型及激活突变型稳转细胞后,检测ERK/CREB信号通路的活化情况,并进行细胞行为学实验。【研究结果】1.成功建立胶质母细胞瘤细胞系A172和U87的SHP2空载,野生型,激活突变型稳转细胞株;2.激活突变的SHP2增强了神经胶质瘤细胞的增殖,迁移和侵袭能力;3.激活突变的SHP2激活了ERK/CREB信号通路,下游相关蛋白如cyclin D1、MMP9表达明显升高;4.裸鼠成瘤实验中,U87细胞的SHP2激活突变组成瘤能力明显高于对照组;5.加入ERK抑制剂U0126后,SHP2突变组ERK/CREB信号通路受到明显抑制,并且增殖和迁移能力显著降低。【结论】1.激活突变的SHP2增强了神经胶质瘤细胞的增殖,迁移,侵袭和裸鼠成瘤能力;2.激活突变SHP2促进神经胶质瘤细胞恶性生物学行为与ERK/CREB信号通路的激活有关。