自身免疫调节因子对小鼠巨噬细胞系RAW264.7极化分型影响的研究

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目的:通过诱导稳定表达AIRE-GFP及GFP的小鼠巨噬细胞系RAW264.7向其四种亚型极化,了解自身免疫调节因子在巨噬细胞极化过程中的作用及其机制,为APECED患者对念珠菌的易感的原因提供一种可能的解释。  方法:⑴利用G418在荧光显微镜下二次筛选稳定表达AIRE-GFP及GFP的小鼠巨噬细胞系RAW264.7。⑵分别利用LPS(500ng/ml)联合IFN-γ(100ng/ml)、IL-4(20ng/ml)、免疫复合物(150μg/ml抗鸡卵清白蛋白单克隆抗体:15ug/ml鸡卵清白蛋白)联合LPS(500ng/ml)、IL-10(20ng/ml)联合地塞米松(100ng/ml)诱导巨噬细胞系RAW264.7向M1、M2a、M2b、M2c型极化,通过RT-qPCR、ELISA、Griess、尿素测定法检测各组巨噬细胞刺激前后,相对特异性细胞因子mRNA表达水平及其相应的蛋白表达水平。⑶通过RT-qPCR分别检测各组巨噬细胞刺激前后AIRE mRNA表达水平。  结果:①成功二次筛选到稳定表达AIRE-GFP及GFP的小鼠巨噬细胞系RAW264.7。②LPS(500ng/ml)联合IFN-γ(100ng/ml)诱导两组巨噬细胞向M1型极化的过程中, AIRE可显著上调其炎性因子IL-1α、iNOS的mRNA表达水平和分泌高浓度IL-1α、NO;IL-4(20ng/ml)诱导两组巨噬细胞向M2a型极化的过程中,结果提示:AIRE可下调M2a型中Arg1 mRNA表达水平及其蛋白活性;免疫复合物(150μg/ml抗鸡卵清白蛋白单克隆抗体:15ug/ml鸡卵清白蛋白)联合LPS(500ng/ml)、IL-10(20ng/ml)联合地塞米松(100ng/ml),分别诱导两组巨噬细胞向M2b、M2c型极化的过程中,AIRE下调M2b、M2c型中IL-10 mRNA和蛋白的表达水平,以及其细胞因子Gas6蛋白的表达水平。③稳定表达AIRE-GFP及GFP的RAW264.7巨噬细胞在不同刺激物作用下,巨噬细胞向M1型极化过程中,AIRE mRNA的表达水平上调;而巨噬细胞向M2型极化过程中,AIRE mRNA的表达水平显著下调。  结论:⑴AIRE在RAW264.7巨噬细胞向M1型极化过程中可能起促进作用,而在向M2型极化过程中可能起抑制作用,提示表达在外周单核巨噬细胞上的AIRE可能通过参与巨噬细胞极化分型的调控,增强机体对病原微生物的杀伤能力,促进机体适应性免疫应答,从而为APECED病人对白色念珠菌的易感的原因提供一种可能的解释。⑵巨噬细胞在向不同亚型极化过程中,可能通过影响AIRE的表达水平,促进巨噬细胞向M1型极化;通过下调其表达,从而抑制巨噬细胞向M2型极化。
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