大鼠甲状腺激素受体β1 cDNA克隆及其在E.coli.中的表达

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 11次 | 上传用户:fuyunyang1
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
甲状腺激素受体(thyroidhormonereceptor,TR)属于核受体超家族的成员,广泛分布在各种组织中。TR存在2种主要的亚型:TRa和TRβ。而由于转录起始点以及剪切方式的不同,每种亚型又包括若干同功体(isoforms)。主要的有TRa1、TRa2、TRa3、TR△a1、TR△a2、TRβ1、TRβ2、TRβ3、TR△β3等。在临床上,TRβ基因与TH抵抗(resistancetothyroidhormone,RTH)有着紧密联系。而进一步了解TRβ结构,对于设计新型降脂药物也有重要意义。 本研究工作中,我们以大鼠肝脏组织的总RNA为模板,RT-PCR方法扩增出全长大鼠甲状腺激素受体β1(rTRβ1)基因编码序列,克隆入pGEM-TEasy载体,纠正其错配碱基后将目的基因插入融合型原核表达载体pQE-30Xa,测序鉴定。重组表达质粒pQE-30Xa/rTRβ1转化入E.coliM15[pREP4],进行融合表达。SDS-PAGE电泳查看表达产物大小和表达量,Western-blotting进一步鉴定。表达条件经优化后,rTRβ1的表达量达到6mg/L培养基。重组蛋白rTRβ1占菌体蛋白的24.32%。目的蛋白含6×His纯化标签,可以经金属螯合亲和层析吸附于Ni-NTA树脂层析柱,冲洗除去非特异吸附的杂蛋白后,将目的蛋白洗脱,透析冻干浓缩。经电泳迁移率改变试验(EMSA)和放射性配体结合试验(RLBA)证实,重组rTRβ1可与目的DNA和T3特异性结合。
其他文献
溶瘤腺病毒是经过改造后只在肿瘤细胞内复制的一类重组腺病毒。其作为肿瘤基因治疗的方法之一,为肿瘤治疗带来希望。但是,临床试验结果差强人意。 靶向基因-病毒疗法(ZD55-
人类疱疹病毒6型(Human herpesvirus 6,HHV-6)是一类嗜人类淋巴细胞的双链DNA病毒,于1986年由美国癌症中心的Salahuddin等首先从淋巴增生及AIDS患者外周血单个核细胞中分离到
Aurora是一类独特的丝/苏氨酸激酶,主要参与调节细胞的有丝分裂和减数分裂。这个家族在人类有Aurora-A,Aurora-B和Aurora-C三个成员,它们主要参与中心体的功能调节,双极纺锤
耳霉属,是生态环境的重要分解者,某些种类还是害虫的病原菌,能够起到生物防治的作用,在菌物的系统学中占有非常重要的地位。马鬃岭自然保护区属于华东亚热带湿润气候,是大别山北坡
过氧化物酶与过氧化氢、卤化物组成的体系具有杀菌/抑菌作用,已广泛被研究。国内外对过氧化物酶体系抗菌作用的研究只限于哺乳动物过氧化物酶(乳过氧化物酶、髓过氧化物酶等),
被誉为上海市“母亲河”的苏州河于20世纪80年代受到严重污染,河水生态功能基本丧失,严重影响到上海人民的生产生活,有损于上海市的可持续发展。针对此情况,上海市政府开展了三期
目的研究一种新开发的生物有机硅化合物—1-氯甲基杂氮硅三环在遗传和生殖方面的毒性作用,可为下一步实验的剂量选择提供依据,最终结合人群流行病学调查资料来全面阐明该化合物的毒性及其潜在危害,预测人类接触或使用该化合物时的安全程度,为制订相应的卫生标准提供科学依据,同时也为生物有机硅化合物作为药物走向临床提供有意义的基础研究资料。方法按照OECD准则采用细菌回复突变实验和大鼠两代繁殖毒性实验来检测1-氯
学位
目的:利用混合乳酸菌对豆渣进行微贮,达到延长豆渣保存期,改善其营养组成和适口性的目的,把豆制品加工副产品--豆渣开发成一种良好的饲料,提高其附加值并减少对环境的污染。 方
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
期刊