固定化蛋白酶的制备及松仁多肽加工工艺研究

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:hongwei3330857
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红松(Pinus koraiensis Sieb.et Zucc),是主产于中国小兴安岭的珍贵树种。红松仁是一种营养价值很高的果品,富含蛋白质、氨基酸、脂肪酸、维生素、矿物质及其它生理活性物质,具有广阔的应用开发潜力。本文以红松松仁为原料,利用现代分离分析手段,对松仁蛋白的提取工艺、酶解条件进行优化,又对最佳蛋白酶进行固定化研究再用其制备松仁多肽,主要结果如下:1、采用超声波辅助碱提酸沉法提取松仁蛋白,最佳工艺条件依次为:料液比1:24.61、pH值10、提取温度48.3℃、超声时间100min。松仁蛋白提取率为233.23 mg/g。超声波辅助提取法可以有效地提高松仁蛋白质的提取率,缩短反应周期。2、选择国产碱性、中性蛋白酶、Alcalase2.4L碱性蛋白酶和风味蛋白酶作为松仁蛋白酶解备用酶,对松仁蛋白进行酶解效果研究,根据其水解程度,确定Alcalase蛋白酶为松仁蛋白酶解的最佳用酶。通过响应面法优化得到此酶作用下的最佳酶解条件为:pH值8.0、水解温度53℃、酶与底物比8800 U/g蛋白、底物浓度1.2%、酶解的时间50min。在最佳酶解的条件下水解度(DH)为43.15%。酶与底物比对其酶解过程具有极显著性影响,其次是pH。3、使用交联-吸附法对Alcalase2.4L蛋白酶进行固定化,研究Alcalase蛋白酶固定化工艺,得到了载体与交联剂浓度、载体交联时间、给酶量、pH、固定化时间的最佳固定化条件:壳聚糖浓度2.5%、戊二醛浓度0.4%、载体交联时间4h、给酶量915U/g载体、pH9.4、固定化时间8h,固定化酶活力回收率为54.35%。同时对固定化酶及溶液酶的米氏常数、最适温度、pH、热稳定性等性质进行了研究和比较。固定化Alcalase蛋白酶重复使用6次,相对活力仍在60%以上。说明固定化Alcalase蛋白酶具使用特性,可用作工业化生产。4、研究了固定化Alcalase2.4L蛋白酶酶解松仁蛋白的工艺。对酶解条件进行了优化,得到固定化Alcalase2.4L蛋白酶最佳酶解条件:底物浓度1.2%、pH值9.0、温度50℃、给酶量0.2g/g底物、反应时间2h,水解度达到25%。说明用固定化Alcalase蛋白酶酶解松仁蛋白制备多肽的方法可行。
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