研究背景:血管内皮细胞衰老是血管衰老、心血管疾病主要的危险因素之一。在中国传统医学中,中药材黄芪被用于治疗心血管疾病已有2000多年的历史。黄芪多糖是黄芪的主要提取物之一,最近的药理学研究显示,它具备多种生物学功能并具有一定的血管保护作用。方法:从大鼠主动脉提取并体外培养原代内皮细胞以备实验研究,使用CD31及vWF免疫荧光、流式细胞术、低密度脂蛋白摄取、管形成、CCK8、Hoechst染色等技术鉴定内皮细胞并评价内皮细胞的功能活性。利用高糖诱导建立内皮细胞衰老模型,观察黄芪多糖对血管内皮细胞P16、P21等衰老指标、线粒体钠钙交换蛋白(NCLX)表达的影响,siRNA抑制NCLX表达后再次观察黄芪多糖对内皮细胞表达P16等衰老指标、IL-1等炎症指标的影响。siRNA抑制NCLX表达前后分别观察黄芪多糖对内皮细胞LC3B等自噬指标的影响,电镜观察自噬体。结果:1)大鼠主动脉内皮细胞提取和原代培养成功,纯度高达94.65%。体外传至第10代仍有稳定的成管、增殖等功能,且未见传代后的内皮细胞中存在衰老相关的β-半乳糖苷酶染色显著阳性的细胞。2)黄芪多糖可以抑制高糖所诱导的主动脉内皮细胞中衰老相关蛋白P16、P21、P53的表达。3)黄芪多糖增强衰老内皮细胞中NCLX的表达。4)下调NCLX可抑制黄芪多糖的抗衰老作用并增加NLRP3、IL-1炎症因子的表达。5)黄芪多糖可促进细胞LC3BⅠ向LC3BⅡ转化,自噬相关蛋白Atg7聚集增多,使p62/SQSTM 1减少,形成自噬体。结论:本研究开发了 一种从大鼠主动脉中分离和培养高纯度的、具有良好功能的血管内皮细胞的新方法,无需胶原酶消化,且体外培养至第10代细胞仍具有功能。黄芪多糖具有延缓血管内皮细胞衰老、抑制炎症的作用,且该作用可能依赖于NCLX的调节。黄芪多糖可通过LC3-p62-Atg7促进自噬体形成,保证自噬通量,这可能是其延缓血管内皮细胞衰老的机制之一。