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目的1.研究社区脑卒中后认知障碍(post stroke cognitive impairment,PSCI)的影响因素及中医证型情况,分析PSCI的影响因素及中医证型分布特点,为PSCI的早期预防及临床中医证型研究提供依据。2.研究PSCI患者血清miRNAs表达谱,分析靶基因的富集功能及其所调控的信号通路,探索PSCI的发病机制;筛选出其中差异表达的miRNAs,以期发现具有良好前景的用于辅助诊断PSCI的生物标志物;探讨目标miRNAs与PSCI痰浊阻窍证可能存在的中医证型相关性,为中医辨证提供分子生物学上的客观依据。方法1.对2016年4月至2016年6月武汉市硚口区的韩家墩社区卫生服务中心、公路社区卫生服务中心、宝丰街社区卫生服务中心、汉正街社区卫生服务中心社区的在档居民进行调查,选择不同程度的有脑卒中或短暂性脑缺血发作病史者作为研究对象,采用MoCA量表和MMSE量表进行认知功能评定并进行分组,分别为脑卒中后认知障碍(PSCI)组和脑卒中后认知正常(PSCN)组。然后,对两组病例进行脑卒中后认知障碍的相关影响因素研究,应用统计学方法对计量资料采用t检验,计数资料采用卡方检验,等级资料采用单因素Logistic回归分析,提取其中P<0.05的变量,进入多因素Logistic逐步回归分析,分析PSCI的相关影响因素及独立影响因素,并对两组病例的中医证候频数分布和各证型中医证候积分进行比较,分析PSCI的中医证型特点。2.通过高通量测序方式测定PSCI患者及对照组(脑卒中后无认知障碍组和正常人组)血清miRNA表达情况,筛选出两组中差异表达的miRNA分子的交集,使用GeneSpring12.5软件进行靶基因预测,并对已知miRNA以及新miRNA预测得到的靶基因进行KEGG生物通路和GO基因功能富集注释,从而分析miRNA在PSCI发病过程中可能的作用机制。3.挑选上述差异miRNAs中的miR-146a和miR-34a,扩大样本量进行qRT-PCR验证,并与PSCI中医证型痰浊阻窍证相关联,分析miR-146a和miR-34a对PSCI疾病的诊断价值,以及与PSCI痰浊阻窍证的相关性。结果1.结果显示,PSCI疾病发生率为39.76%。性别上,男性患病率为38.00%,女性患病率为41.24%,女性患病率高于男性(P>0.05)。年龄上,两组年龄有显著差异(P<0.05),从各组的疾病发病率来看,随年龄增长呈升高趋势,≥80年龄组段发病率略有降低。文化程度上,PSCN组初中以上文化程度较PSCI组人数增高,PSCN组的整体文化程度较高(P<0.05)。脑卒中危险因素中,高脂血症是PSCI发生的影响因素(P<0.05),吸烟、高血压病、高脂血症、糖尿病、肥胖、脑卒中家族史是PSCI的危险因素。生活习惯中,阅读因素是PSCI发生的影响因素(P<0.05),并且阅读和定量的蔬菜、水果摄入是PSCI的保护因素。将单因素分析中P<0.05的影响因素进行多因素回归分析,发现年龄、文化程度、高脂血症、阅读是PSCI的独立影响因素(P<0.05),其中文化程度和阅读是PSCI的保护因素。中医证候频数分布上,PSCI组的证型出现频率从高到低依次是肾精亏虚证、痰浊阻窍证、瘀血阻络证、火热内盛证、气血亏虚证、肝阳上亢证、腑滞浊留证。PSCI组与PSCN组在肾精亏虚证、痰浊阻窍证两组证型中差异有统计学意义(P<0.05),且PSCI组肾精亏虚证、痰浊阻窍证在二组中发病率均偏高。PSCI组与PSCN组在其余证型中差异无统计学意义(P>0.05)。PSCI组单一证候出现比率较低,复合证候出现比率与对照组相比较高,差异有统计学意义(P<0.05)。两组中医证候积分均数比较后发现,肾精亏虚证和痰浊阻窍证有显著性差异(P<0.05),其他各证型差异无显著性(P>0.05)。2.PSCI患者血清mi RNA的表达谱结果显示,与对照组相比,在脑卒中(无认知障碍)患者中共有40个差异miRNAs(19个上调,21个下调),在PSCI患者中共有43个差异miRNAs(21个上调,22个下调)。使用维恩图统计两个对比组共有的差异miRNAs,发现有20个共同的差异miRNAs,为miR-132-5p,miRNA-135a,miR-31,miR-93,miR-143,miR-146a,miR-5704,miR-4639-3p,miR-107,miR-5572,miR-204-3p,miR-542-5p,miR-155-5p,miR-222,let-7g,miR-126,miR-197,miR-29a,miR-451,miRNA-34a。对这20个miRNAs进行靶基因功能分析发现,这些miRNAs的靶基因主要富集在MAPK signaling pathway,Axon guidance等通路中。3.miR-146a与miR-34a呈显著正相关(r=0.661,P=0.000)。miR-146a对痰浊证和肾虚证的ROC曲线面积为0.920,标准误为0.060,P=0.001,具有统计学意义。miR-146a截断值为0.415,敏感度80%,特异度为90%,具有良好的诊断价值,提示当患者miR-146a水平为正常人水平的0.979时,能作为辅助指标诊断该患者为痰浊证。miR-34a对痰浊证和肾虚证的ROC曲线面积为0.940,标准误为0.061,P=0.001,具有统计学意义。miR-34a截断值为0.106,敏感度90%,特异度为100%,具有良好的诊断价值,提示当患者mi R-34a水平为正常人水平的0.106时,能作为辅助指标诊断该患者为痰浊证。结论1.本研究发现PSCI具有较高的发病率,与性别、年龄、文化程度、脑卒中危险因素、生活习惯等相关。研究发现年龄、文化程度、高脂血症、阅读是PSCI的独立影响因素,其中文化程度和阅读是PSCI的保护因素。PSCI组与PSCN组在肾精亏虚证、痰浊阻窍证两组证型中的频数分布存在差异(P<0.05),且PSCI组肾精亏虚证、痰浊阻窍证在二组中发病率均偏高,提示肾精亏虚证、痰浊阻窍证是PSCI的主要证型。2.本研究使用高通量测序技术首次获得了PSCI患者血清表达谱,并找到了一些在PSCI患者中异常表达的miRNAs。对这些miRNAs进行靶基因功能分析发现,其主要富集在MAPK signaling pathway,Axon guidance等通路中,这些通路均与神经系统的功能密切相关。3.miR-146a和mi R-34a对PSCI均具有良好的临床诊断价值,miR-146a在PSCI患者血清中较对照组呈现显著上调,miR-34a在PSCI患者血清中较对照组呈现显著下调,通过qRT-PCR验证后,认为miR-146a、miR-34a具有较高的灵敏性和特异性,可以作为PSCI患者的生物标志物,且对PSCI痰浊阻窍证可以起到辅助诊断的作用。