产细菌素植物乳杆菌的初探及其应用

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乳酸菌新资源及特性的研究一直倍受关注。乳酸菌产生的乳酸菌素也早在1928年被很多研究学者所认知,并不断广泛深入地研究。由于乳酸菌素具有高效、无毒、无残留、无抗药性等优点,在很多应用领域是人工合成的防腐剂及抗生素最佳的替代物。本研究通过分离纯化一株植物乳杆菌ZJ317所产乳酸菌素,优化发酵条件提高乳酸菌素的产量,并考察该菌作为饲料添加剂的应用效果,以期代替饲料抗生素。本研究的主要内容分为三部分:1)比较三种粗提方法,即吸附法、硫酸铵盐析、双水相萃取法,对分离植物乳杆菌ZJ317抑菌活性物质的效果,结果显示,PEG/(NH4)2SO4双水相体系的萃取效果最好,萃取条件为:17.971%的PEG 2000,18.430%的硫酸铵,1%的NaCl, pH为3.766;随后采用流动相为蒸馏水,流速为1 mL/min的SephacrylS-100 HR凝胶过滤层析法,除去PEG等物质;经各种离子层析法筛选,选定DEAE Sepharose Fast Flow层析柱,纯化条件为:流速1 mL/min,平衡液为pH为5.4,20 mM的乙酸-乙酸钠缓冲液,洗脱液为含1 M NaCl的平衡液;再经Tricine-SDS-PAGE电泳法检测该抑菌活性物质的分子量为4.0 kDa左右,属于小分子多肽类物质,证实植物乳杆菌ZJ317产的抑菌活性物质为乳酸菌素,命名为植物乳杆菌素ZJ317。2)通过单因素实验、PB实验、最陡爬坡试验及响应面法优化的最佳发酵条件为:培养温度为37℃,装液量为20 mL/50 mL,培养基初始pH值为6.5,接种量为5.00%;2.15%葡萄糖、1.50%麦芽糖、0.50%蛋白胨、1.60%酵母提取物、0.20%磷酸二氢钾、0.50%乙酸钠、0.20%柠橡酸三铵、0.02%七水硫酸镁、0.005%四水硫酸锰,0.20%吐温80,产植物乳杆菌素ZJ317的效价较优化前提高了60.22%。3)初步研究植物乳杆菌素ZJ317及其生产菌共同作为饲料添加剂应用于刚断奶的仔猪。其对生产性能的影响显示,添加该乳酸菌素活菌饲喂仔猪,可以提高仔猪的日增重,提高饲料转化率;从腹泻率和死亡率看,可以起到抗生素痢菌净一样抑菌的效果;对肉品质的影响,其对肉色和pH值没有改观,在正常范围内,却提高了肉的系水力及嫩度;利用PCR-DGGE法分析仔猪肠道菌群变化,结果表明,植物乳杆菌素ZJ317及其生产菌发酵液的协同作用可以部分替代抗生素痢菌净,维持肠道菌群平衡。
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