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随着转基因技术的不断发展,转基因小鼠、鱼、兔、猪、猴、牛、鸡等多种转基因动物相继问世并广泛应用于医药、卫生、农业和生物材料等众多领域,因此转基因动物及其产品的安全性问题也日益受到关注。目前,多数转基因动物在制备过程中经常使用来源于病毒或细菌的抗性筛选标记,如新霉素磷酸转移酶(neo)、嘌呤霉素乙酰转移酶(puro)、潮霉素B磷酸转移酶(hph)、黄嘌呤/鸟嘌呤磷酸转移酶(gpt)、次黄嘌呤磷酸转移酶(Hprt)、白喉毒素(DT)、胸腺嘧啶激酶(tk)等。因此,建立转基因动物标记基因的检测方法及标准,对转基因动物进行生物安全评价十分必要。外源基因及其表达产物检测方法主要包括PCR、Southern blot、基因芯片、ELISA、Western blot和蛋白质芯片等,但这些方法需要比较严格的技术要求和相对昂贵的设备仪器或试剂,并不适用于基层单位的检测和在现场的快速检测。环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,简称LAMP)是日本荣研化学株式会社的Notomi T团队于2000年开发的一种新型核酸扩增方法。LAMP法特异性强、灵敏度高、简单省时,对操作人员不需要进行严格的专业培训,且不需要昂贵的检测仪器,适用于基层单位的检测,满足现场的快速检测的要求,具有非常广泛的应用前景。本研究以环介导等温扩增技术(LAMP)为基础,建立一种可视化、快速检测转基因动物外源标记基因的方法。成功筛选出一套特异性LAMP引物,建立并优化LAMP反应体系,使反应在50-60min范围内即可完成;对转基因猪Neo基因进行LAMP和PCR两种方法的检测,其中LAMP法灵敏度达到2pg/μl,比PCR法高出3个数量级;分别用LAMP法和PCR法检测50个转基因猪样本,测得结果一致性为98%。本研究的结果可为转基因动物抗性基因的检测提供了新方法。