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第一部分FOXO3a在胃癌组织中的表达与胃癌患者临床病理特征的相关性研究[摘要]目的：检测FOXO3a在胃癌组织中的表达,并分析FOXO3a的表达程度与胃癌患者临床病理特征的相关性。方法：收集2006～2008年在复旦大学附属中山医院接受胃癌根治术的患者的胃癌组织标本共150例制成组织芯片,进行免疫组织化学染色。根据FOXO3a在胃癌组织中的染色强度和染色面积将上述患者分为FOXO3a高表达组和低表达组,分析两组患者在年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、浸润深度、是否有淋巴结转移、TNM分期、脉管侵犯和神经侵犯等方面的差别。结果：150例患者中男性109例,女性41例,平均年龄61.2岁。95例胃癌组织高表达FOXO3a,占63.3%。FOXO3a高表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移、血管侵犯及患者TNM分期呈正相关,但与患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤分化程度及神经侵犯无相关性。结论：FOXO3a在胃癌组织中高表达,其表达量与患者肿瘤浸润深度、淋巴结转移程度、血管侵犯及TNM分期呈正相关,可能成为胃癌患者的负性预测因子。第二部分FOXO3a异常表达对胃癌细胞株增殖、迁移、侵袭和化疗药物敏感性的影响[摘要]目的：通过慢病毒载体靶向抑制FOXO3a基因,探讨FOXO3a异常表达对胃低分化腺癌细胞株AGS增殖、迁移、侵袭和化疗药物敏感性的影响。方法：利用FOXO3a慢病毒干扰载体和空载体感染AGS细胞株,分别构建AGS-FOXO3a-shRNA干扰株和AGS-negative-shRNA对照株。MTT法测定细胞增殖,划痕试验检测迁移能力,Transwell试验检测侵袭能力。Western blot测定细胞内Cathepsin D和Cathepsin L蛋白的表达水平。上述细胞系与不同浓度的伊立替康、奥沙利铂、紫杉醇共培养48小时,MTT法测定48小时细胞抑制率,计算IC50和RI；流式细胞仪检测不同化疗药物对细胞凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果：转染FOXO3a-shRNA可有效降低AGS-FOXO3a-shRNA细胞株内FOXO3a mRNA和蛋白的表达。同对照株相比,AGS-FOXO3a-shRNA的细胞增殖未受到明显影响,但迁移和侵袭能力明显下降,同时细胞内成熟型Cathepsin D、Cathepsin L的蛋白表达水平均较对照株明显降低。AGS-FOXO3a-shRNA对伊立替康和奥沙利铂的敏感性明显上升,流式细胞仪检测到在伊立替康和奥沙利铂作用48小时后,AGS-FOXO3a-shRNA细胞的凋亡百分比显著高于对照株,差异有统计学意义。同时细胞内活性Caspase-3的蛋白表达水平较对照组明显升高,PARP-1的蛋白表达水平较对照组明显降低,Caspase-9、Bax、Bcl-2的表达水平较对照组无明显差异。AGS-FOXO3a-shRNA细胞在紫杉醇作用48小时后,细胞内Caspase-3、PARP-1、Caspase-9、Bax、Bcl-2的蛋白表达水平均较对照株无明显差异。结论：我们的实验证实FOXO3a-shRNA通过下调细胞内成熟型Cathepsin D和Cathepsin L的表达来抑制胃低分化腺癌细胞株AGS的迁移和侵袭,同时通过上调细胞内死亡受体凋亡通路来增强伊立替康和奥沙利铂诱导的细胞凋亡,增加胃癌细胞对伊立替康和奥沙利铂的敏感性。FOXO3a-shRNA可能成为一种新的抗肿瘤治疗手段。