【摘 要】
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目的:探究夫西地酸（Fusidic acid,FA）联合黄芩素（baicalein,BE）对金黄色葡萄球菌的体内外抗菌作用及其防耐药突变浓度（Mutant prevention concentration,MPC）和生物膜机制的影响。方法:1.以13株金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）为研究对象,以夫西地酸、黄芩素单独或联合应用为基础,通过微量肉汤稀释法与微量棋盘稀
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目的:探究夫西地酸（Fusidic acid,FA）联合黄芩素（baicalein,BE）对金黄色葡萄球菌的体内外抗菌作用及其防耐药突变浓度（Mutant prevention concentration,MPC）和生物膜机制的影响。方法:1.以13株金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）为研究对象,以夫西地酸、黄芩素单独或联合应用为基础,通过微量肉汤稀释法与微量棋盘稀释法,分别监测其对SA的最低抑菌浓度（Minimum inhibitory concentration,MIC）,并计算部分抑菌浓度指数（Fractional inhibitory concentration index,FICI）,以此来评价二者联合作用的效果。用时间杀菌曲线法测定24h内夫西地酸和黄芩素单用及联用后的细菌菌落数并绘制时间杀菌曲线。2.利用琼脂二倍稀释法对5株金黄色葡萄球菌的MPC和防耐药突变选择窗（Mutant selective window,MSW）进行测定,比较夫西地酸单独应用及联用黄芩素后防耐药突变窗的变化。3.采用在体内建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA）感染的小鼠肺炎模型的方法,将小鼠检测夫西地酸和黄芩素单独及联合治疗后各组小鼠生命体征、肺脏器指数、菌落定植数以及血清中炎性因子的变化。4.建立金黄色葡萄球菌生物膜模型,采用结晶紫染色法测定菌落生物膜形成能力,分别比较夫西地酸联合黄芩素对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制和破坏作用。结果:1.夫西地酸单用对13株金黄色葡萄球菌的MIC范围为0.25-4μg/m L,黄芩素对13株金黄色葡萄球菌的MIC范围为128-256μg/m L。体外实验结果表明,夫西地酸联合黄芩素对13株金黄色葡萄球显示53.8%为协同作用,30.8%为相加作用,15.4%为无关作用。两药联用时夫西地酸最佳抑菌浓度较夫西地酸单用对ATCC29213、ATCC43300 MIC分别降低75%、75%,黄芩素最佳抑菌浓度较黄芩素单用对ATCC29213、ATCC43300 MIC降低93.75%、93.75%。两药联用时夫西地酸最佳抑菌浓度较夫西地酸单用对临床菌株SA51、临床菌株MRSA212等11株临床菌株降低的百分比范围为50%-98.4%。黄芩素最佳抑菌浓度较黄芩素单用对临床菌株SA51、临床菌株MRSA212等11株临床菌株降低的百分比范围为0%-93.75%。夫西地酸和黄芩素对3株金黄色葡萄球菌的时间杀菌曲线显示,夫西地酸（1/2MIC）联合黄芩素（1/2MIC）在24h时对金葡菌ATCC29213、ATCC43300及MRSA-210702212均有协同杀菌作用,且随着夫西地酸浓度（1MIC）的增加,两药联用的杀菌效果更明显。2.夫西地酸单用对ATCC29213、ATCC43300、MRSA212、MRSA118和SA51的MPC分别为256、256、128、＞256和＞256μg/m L,SI分别为512、256、64、＞512和＞256。对于ATCC29213,夫西地酸和黄芩素联用使夫西地酸的MPC从256下降到16μg/m L;对于ATCC43300,两药联用使夫西地酸的MPC值由原来256下降到16μg/m L;对于临床菌株MRSA212,两药联用使夫西地酸的MPC值由原来128下降到16μg/m L;对于临床菌株MRSA118,两药联用使夫西地酸的MPC值由原来＞256下降到8μg/m L;对于临床菌株SA51,两药联用使夫西地酸的MPC值由原来＞256下降到32μg/m L。以上5株菌,联合用药使得夫西地酸的SI分别缩小16、16、8、32、8倍。3.联合组对感染金黄色葡萄球菌小鼠的生命体征影响最小。小鼠肺脏器指数、肺脏金葡菌的定植数量及血清中炎性因子的实验结果表明,联合组对金葡菌小鼠肺炎的治疗效果明显优于夫西地酸和黄芩素单药组,具有极其显著统计学差异（P＜0.001）。4.夫西地酸和黄芩素单用及联用均对金黄色葡萄球菌的生物膜生长表现出不同程度的抑制作用和破坏作用。对于金黄色葡萄球菌ATCC29213、ATCC43300和MRSA212,联合组对金葡菌的抑制率和破坏率均高于夫西地酸及黄芩素单药组。结论:夫西地酸与黄芩素联用对金黄色葡萄球菌具有协同杀菌作用。夫西地酸单独应用时,MSW较宽。当联用黄芩素后,夫西地酸的MSW可明显缩小,减缓夫西地酸产生耐药性。夫西地酸联合黄芩素对治疗金黄色葡萄球菌感染小鼠效果较单用夫西地酸和黄芩素效果更好。夫西地酸和黄芩素通过抑制金黄色葡萄球菌生物膜的生长发挥协同抗菌作用。
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