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大量的调查研究表明,环境中的雌激素及其类似物(统称为环境内分泌干扰物,EEDCs)在进入生物体内后,能干扰体内正常激素合成、分泌、转运、结合及代谢等过程,进而激活或抑制内分泌系统的功能,并对个体或子代的健康造成危害。本课题拟选用重组酵母测评系统以及MCF-7增殖实验测评系统,检测四种天然雌激素活性,及其复合效应,并通过引入四种复合作用模型,即效应叠加法(ES)、浓度加和法(CA)、独立作用法(IA)和毒性等效因子法(TEF),预测不同组合方式下雌激素复合效应,然后将预测效应与实验结果进行比较与评价,得出能够较好地预测雌激素复合效应的模型。
重组酵母测评系统具有灵敏、简便、快速、经济等优点,应用前景十分广泛。本课题采用17β雌二醇(E2),乙炔雌二醇(EE2),雌三醇(E3)、雌酮(El)作为受试物,研究不同稀释倍数、酵母扩增时间(不同代次)、菌体与受试物接触时间以及酵母菌与显色剂不同接触时间等因素对雌激素活性的影响,优化实验条件,然后以不容方式组合测定复合效应,并与四种复合作用模型预测结果进行比较。结果显示:稀释倍数、酵母扩增时间对雌激素活性有一定的影响;菌体与受试物接触时间、醉母菌与显色剂接触时间对雌激素活性影响最大。运用该方法检测环境雌激素的优化组合为:水浴扩增酵母24h-30h,受试物作用时间2h,三氯乙烷裂解酵母细胞,酶反应时间为30min。
MCF-7细胞增殖实验(E-SCREEN方法)被认为是目前国内外最常用的雌激素体外检测方法之一,具有灵敏度高、可同时检测多种环境雌激素、快速简便等特点。通过本研究发现,不同来源的人乳腺癌细胞MCF-7对雌激素敏感性不同,MCF-7细胞增殖实验受培养条件、在去雌激素培养基中培养时间、溶剂效应以及细胞与受试物的接触时间等因素的影响。结果显示:实验中尽量减少DMSO的使用,提前换用无酚红去激素培养基有利于样品雌激素效应的检测,但细胞在无酚红去激素培养基中培养时间不宜超过7d,细胞与药品接触时间为48h,条件较为适宜。
优化后的两种方法用于复合效应研究,在被检测的物质组合中,二元混合物表现出的协同作用比例较小(分别为19.0%和6%)。在重组酵母实验中,CA复合作用模型的预测效果较好;而在MCF-7增殖实验中,IA预测效果较好。