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大黄鱼是我国养殖量最大的海水经济鱼类之一,但是随着其养殖业的快速发展,因病毒和细菌等引发的病害日趋严重,造成重大经济损失。因此,加强对大黄鱼免疫学理论的基础研究,了解其抗病免疫机制,对大黄鱼疾病控制和养殖业健康发展十分重要。本研究利用RT-PCR和RACE-PCR技术克隆了大黄鱼Ran、Rab和Rac及互作因子的基因全长cDNA序列,原核表达Ran、Rab和Rac及互作因子蛋白质并制备了6个相应的抗体,利用荧光定量PCR和Western blot技术研究了大黄鱼Ran、Rab、Rac和MLC在转录和翻译水平的组织表达谱,以及灭活的溶藻弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和病原模式分子LPS、Poly I:C免疫刺激后脾脏、血液和肝脏中的表达变化；然后通过蛋白质相互作用的方法研究了Ran、Rab和Rac相互作用的蛋白质。获得以下主要研究结果：1.大黄鱼Ran基因cDNA全长1033bp,其中开放阅读框为648bp,编码215个氨基酸。GTP结合实验分析证明Ran蛋白具有GTP结合活性。定量PCR和Western实验表明Ran在所检测的大黄鱼肾脏、肝脏、鳃、肌肉、脾脏、皮肤、心脏、肠和血液中均有转录和表达,在肾脏中表达量最高,皮肤中表达量最低。荧光定量PCR分析表明,受病毒类似物Poly I：C和灭活的溶藻弧菌刺激后,大黄鱼肾脏、血液和脾脏中Ran基因的表达水平明显上调。蛋白质相互作用研究表明,大黄鱼体内Ran蛋白与吞噬作用的关键蛋白肌球蛋白轻链结合蛋白(MLC)存在相互作用。2.大黄鱼Rab基因cDNA全长796bp,其中开放阅读框为624bp,编码207个氨基酸。GTP结合实验分析证明Rab蛋白具有GTP结合活性。定量PCR和Western实验表明Rab在所检测的大黄鱼9个组织中均有转录和表达,在血液中表达量最高,皮肤中表达量最低。荧光定量PCR分析表明,受病毒和灭活的溶藻弧菌刺激后,大黄鱼肾脏、血液和脾脏中Rab基因的表达水平明显上调。蛋白质相互作用研究表明大黄鱼体内Rab蛋白与肌动蛋白(Actin)存在相互作用。3.大黄鱼Rac基因cDNA全长1221bp,其中开放阅读框为579bp,编码192个氨基酸。GTP结合实验分析证明Rac蛋白具有GTP结合活性。定量PCR和Western实验表明Rac在所检测的大黄鱼9个组织中均有转录和表达,在鳃中表达量最高,脾脏中表达量最低。荧光定量PCR分析表明,受病毒和灭活的溶藻弧菌刺激后,大黄鱼肾脏、血液和脾脏中Rac基因的表达水平明显上调。蛋白质相互作用研究表明大黄鱼体内Rac蛋白与原肌球蛋白(TPM)存在相互作用。基于Ran、Rab、Rac基因在免疫刺激后表达量均明显上调,其互作蛋白都是天然免疫中吞噬作用的关键蛋白,提出Ran、Rab和Rac在大黄鱼免疫反应中起着重要作用。