TMEPAI(Transmembrane prostate androgen-induced protein)蛋白主要定位于溶酶体,有助于维持溶酶体结构与功能的稳定,其在细胞中的运输和定位与E3泛素连接酶Nedd4密切相关。TMEPAI在很多癌细胞中高表达,并在肿瘤发生和发展过程中起着重要的调控作用。为进一步研究TMEPAI溶酶体运输的机制以及在肿瘤发生中的作用,本论文做了以下工作:通过TMEPAI蛋白体外泛素化实验表明TMEPAI主要发生单泛素化修饰,TMEPAI体内泛素化也验证了 TMEPAI发生单泛素化修饰;免疫荧光实验显示TMEPAI泛素化影响其到溶酶体的运输,而不发生泛素化的TMEPAI定位于细胞膜;通过酵母双杂交系统筛选出TMEPAI互作蛋白HGS和STAM,RNA干扰HGS表达后,TMEPAI蛋白与溶酶体没有共定位,且蛋白水平明显下降。GST pull-down实验表明TMEPAI与Nedd4蛋白WW2、WW3和WW4结构域互作,且WW2和WW3结构域是其主要的互作结构域,利用Superdex-200分子筛分离纯化出TMEPAI-Nedd4蛋白复合物;酵母双杂交系统证实TMEPAI与其它Nedd4家族蛋白 Nedd4L、Smurf1、Smurf2、WWP1、WWP2 及 Rsp5 相互作用。以上实验结果表明,TMEPAI蛋白在细胞内运输需要Nedd4泛素连接酶和泛素结合蛋白HGS的参与,TMEPAI-Nedd4互作位点可以作为一个潜在的癌症治疗药物靶点。