2000年3～4月在山东省四个用药情况不同的保护地番茄上采集灰霉病病果，在室内进行了番茄灰霉菌（Botrytis cinerea）对三种不同类型杀菌剂的抗性监测，明确了各抗性曲株的抗性频率、抗性水平。利田从田间采集分离的不同类型菌株，进行了抗性稳定性和在离体、活体条件下的药剂敏感性测定；用乙霉威对其敏感菌株利抗性菌株进行了抗性培育；研究了不同类型菌株的适合度，初步探讨了抗性菌株对多菌灵、腐霉利、乙霉威的抗性机理。在室内用菌丝生长速率法测定了12种杀菌剂对绿色木霉、黄绿木霉、钩状木霉和哈茨木霉的毒力，通过紫外光结合含药培养基的方法定向诱导了多菌灵、腐霉利的抗性突变体，对抗性突变体进行了离体适合度利离体、活体拮抗能力以及次生代谢物的毒力测定。研究表明： （一）、灰霉菌的多重抗药性研究 1．在用药历史长、水平高的寿光丰城，灰霉菌对多菌灵、腐霉利、乙霉威产生多重抗性的菌株出现频率为53.7％，对多菌灵、腐霉利产生双抗的菌株出现频率为100％：在泰安良庄，上述菌株出现的频率分别为6.8％和72.7％；在泰安黄家庄，上述菌株出现的频率分别为0和3.4％：在新建棚区新泰龙廷均为敏感菌株。所有的多菌灵抗性菌株均属高抗菌株(EC₅₀＞100mg/L)，腐霉利抗性菌株均屈低抗菌株(1mg／L＜EC₅₀＜10mg／L)，乙霉威抗性菌株均属低抗菌株(0.9me／L＜EC₅₀＜4mg/L)；证实了一种新的多重抗性类型：B^RN^LRD^R； 2．在无药PDA培养基上连续转移培养8次后，各抗性菌株对多菌灵、腐霉利、乙霉威的抗性程度并未降低； 3．分别川含0.1mg/L、5mg／L乙霉威的PDA培养基对B^RN^S和B^RN^LR类型菌株进行了乙霉威抗性培育，每7天转移一次，共转移20次后，各类型菌株对乙霉威的抗性未见上升； 4．不同类型药剂对不同类型菌株的离体、活体毒力测定结果表明，苯并咪唑类的多菌灵、甲基硫菌灵之间，二甲酰亚胺类的腐霉利、异菌脲，菌核净之间表现交互抗性，苯并咪唑类和N-苯氨基甲酸酯类乙霉威呈现典型的负交互抗性。离体测定中，对不同类型菌株以吡咯类杀菌剂咯菌腈(EC₅₀＜0.02mg/L)毒力最高，其次为嘧啶胺类杀菌剂嘧霉胺和甾醇抑制剂中的戊唑醇、氟硅唑和丙环唑(EC₅₀＜1mg/L)；活体测定较离体测定与田间效果具有较高的相关性，除嘧霉胺的毒力较小((EC₅₀＞200mg/L)，咯菌腈以及甾醇抑制剂戊唑醇、氟硅唑和丙环唑均表现出较高的活性； 5．在离体适合度上，多重抗性菌株在菌丝生长速率、渗透压敏感度和致病力上与其它抗性类型菌株和敏感菌株差异不明显，但在产孢量上在20℃条件下其产孢量少，与敏感菌株差异明显，在菌核数上则显著高于敏感菌株； 6．用多菌灵盐酸盐、乙霉威、腐霉利处理不同类型菌株菌丝体，结果表明：敏 丁中 番茄灰霉菌及几枯抗菌不霉的抗药性研究 感菌株对多菌灵盐酸盐具有强烈的吸附束缚活性，能吸附大量的多菌灵盐酸 盐，多菌灵抗性菌株则不表现吸收来缚的活性；多重抗性菌株在乙霉威 0．02mg／L浓度下能渗透出更多的电解质，但在大子0．ling／L时未表现上述 现象；不同类型菌株经腐霉利处理后，3小时内其细胞膜渗透势无明显不同： 7 用一定浓度范围内的多菌灵、腐霉利、乙霉威处理不同类型菌株菌丝体一定 时间，其PAL活性均有所提高，但其活性与抗性类型无相关性； 8．酯酶同工酶聚丙烯酚胺凝胶电泳测定结果表明，通过酯酶同工酶谱可以厂分 灰霉菌各采集地菌株间灼差异，对于表现型相同的菌株，它们之间的酯酶同 工酶谱并不完全相同，说明不同抗药性菌株来源于遗传背景不同的群体，而 不是单一的基因系广泛传播所致； 9．可溶性蛋白聚丙烯酚胺凝胶山泳测定结果表明，从蛋白谱带上可分辨出19 个蛋白条带，与酯酶同工酶电泳的条带相比较，可溶性蛋白条带表现出更多 的差异，表现出灰霉菌的多态性。 （二）、木霉的抗药性研究 1．多菌灵、甲基硫菌灵、异菌腺、腐霉利、甲基立枯磷、烯I4醇、白凶消、福 美双对绿色木霉、黄绿木霉、钩状木霉利哈茨木霉四种木霉的毒力较高，其 砒。。值均小于IO：叭。三哇类杀菌剂对木霉菌的毒力变化较大：四种木霉由 对代森锰锌的敏感性变化较大； 2．通过紫外光定向诱导结合含药培养基的方法得到了三个腐霉利抗性共变曲株 SUV－l、SUV－2和 SUV－2，其抗性水平在 100倍以上，与异菌腮、跑核呼和甲 基立枯磷存在交互抗性； 3．抗性菌株在无药培养基上连续转移培养8次，抗性程度未见卜降； 4．在适合度上，抗性菌株的曲丝生＊速率有所下降，在产抱能力上SU’V－1显柠 高了其它菌株，在活体抑由能力以及次生代谢物活性上 StTV－l和 SUV－3要高 丁亲本由株。三个抗性菌株均保持了对灰霉病菌的离体拈抗能力。