目的本研究以黑果枸杞为研究对象,目的是以枸杞子质量标准为参考,结合黑果枸杞肝肠代谢研究,建立一套黑果枸杞质量评价标准。本研究分别从大类成分含量控制、单体化学成分含量控制、药材整体指纹图谱、特征指纹图谱多角度出发,将检测方法与药效相关联,对黑果枸杞整体质量控制提供了多重参考。同时,本研究中有关黑果枸杞肝肠代谢的研究可以进一步推进我们发现黑果枸杞的有效成分。研究方法1.采用LC-MS联用技术分析黑果枸杞提取物中的化学成分,对黑果枸杞所含化学成分进行质谱分析,并为黑果枸杞鉴别实验与含量测定实验中对照品的选择提供依据;2.利用大鼠在体封闭肠环法,结合LC-MS联用技术研究黑果枸杞水提物的肝肠代谢信息,锁定以原形或者代谢形进入血液系统的化学成分,作为含量检测中指标性成分的选择依据;3.运用HPLC技术,建立黑果枸杞的特征指纹图谱和原花青素低聚体特征图谱,对黑果枸杞的组成进行整体评价;4.建立黑果枸杞中大类成分(多糖、黄酮、多酚、原花青素)和指标性成分含量测定方法,对黑果枸杞的化学成分含量进行评价。研究成果1.结合文献报道,对黑果枸杞提取物LC-MS图谱进行解析,共解析出49个成分,包含生物碱类(甜菜碱、酰胺类生物碱等)、花色苷类(主要为矮牵牛素类花色苷)、鞣质类(主要为咖啡酰鞣质)、苯丙素类(苯丙酸类、香豆素衍生物)、黄酮类(芦丁、柚皮素等)等化学成分;2.结合文献报道,对黑果枸杞肝肠代谢动物实验后血浆中新生成分做LC-MS分析,推测以原形入血的化学成分有:p-香豆酸、N-乙酰色氨酸、阿魏酸等;以代谢形入血的化学成分有:咖啡酰鞣质类、黄酮等;3.建立了黑果枸杞特征指纹图谱与原花青素低聚体特征指纹图谱,运用“中药色谱指纹图谱相似度评价软件2012版”软件,并结合聚类分析对黑果枸杞样品的相似性进行了评价;4.以黑果枸杞中化合物LC-MS解析结果为参考,结合文献报道,选择适宜的对照品和方法,本研究建立了黑果枸杞多糖、黄酮、多酚和原花青素总含量测定的方法;.5.以《中国药典》2015版将甜菜碱作为枸杞子含量控制指标性成分为参考,本研究同样选定甜菜碱作为黑果枸杞质量控制的指标性成分之一,建立了一套对黑果枸杞样品中甜菜碱含量测定的HPLC-UV法;6.结合大鼠肝肠代谢实验结果,以“可以以原形或者代谢物形式进入血液系统”的化学成分作为含量控制指标性成分备选。以百分含量高于0.01为标准,在备选成分中筛选出绿原酸、p-香豆酸和芦丁作为最终的黑果枸杞含量测定指标性成分,并建立了相应的HPLC-UV测定法。结论及意义本研究通过建立黑果枸杞指纹图谱鉴别方法、大类成分和单体成分含量控制方法,响应了中药质量控制的“整体性”,“多组分控制”和“检测方法与活性物质相关”指导原则。所建立的方法可以有效表征黑果枸杞的化学成分特征,可用于对黑果枸杞产地和质量优劣的鉴别与评价。且本研究对黑果枸杞肝肠代谢的研究有利于后续发现黑果枸杞中活性成分。