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目的:通过Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞建立AD细胞模型。检测诱导细胞的凋亡情况,探讨凋亡机制是否与Notch信号通路以及TFF3的表达有关。方法:1.MTT法检测不同药物浓度、不同作用时间下Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞的存活率,并筛选Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞氧化损伤的最佳药物浓度和时间。2.通过显微镜下观察H-E、Hotest33258染色,细胞形态的变化,DNA ladder观察凋亡的DNA片段,并检测凋亡相关基因caspase-3,8,9 m RNA的变化,进而验证AD细胞模型。3.通过RT-PCR及Western blot检测Notch-1、Hes-1等Notch信号通路相关靶点的m RNA和蛋白以及TFF3 m RNA和蛋白的表达,4.免疫细胞化学染色观察TFF3蛋白的定位及表达变化。结果:1.分别以10、20、40、80μmol/L等浓度的Aβ25-35作用于SHSY5Y细胞,随着药物浓度的增加以及作用时间的延长,细胞的存活率逐渐下降,以细胞的存活率的变化筛选20μmol/L,48h为最适给药浓度及作用时间。2.H-E染色,普通光学显微镜下,正常组细胞核均匀饱满,呈蓝色,胞质均匀淡染,呈粉红色,细胞呈多边形或梭形;Aβ25-35药物组细胞核皱缩或碎裂,呈浓密深蓝色,胞质稀薄,呈淡粉色,细胞呈不规则改变。3.hoechst33258染色,荧光显微镜下,可见正常组细胞核形态均一完整,呈均匀的淡蓝色荧光。Aβ25-35药物组可见典型的凋亡形态改变,细胞核聚集、皱缩,呈致密浓染,荧光增强。琼脂糖凝胶电泳可见明显的阶梯状DNA条带。4.RT-PCR实验结果显示,Aβ25-35药物组中凋亡相关基因caspase-3,8,9以及Notch-1,Hes-1m RNA的表达高于正常组,而TFF3的m RNA的表达低于正常组。5.Western blot实验结果与m RNA结果一致,药物组与正常组相比,Notch-1,Hes-1蛋白的表达上调,而TFF3蛋白的表达下调。6.TFF3免疫组化结果显示,TFF3蛋白正常组免疫阳性信号强,位于胞质,核大而浅染,核仁明显;Aβ25-35药物组与正常对照组相比,细胞皱缩呈圆形或不规则形,胞质中可见TFF3蛋白呈弱阳性表达,胞核浓缩。结论:1.浓度为20μmol/L的Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞48h,可以建立AD细胞模型,并且SH-SY5Y细胞呈凋亡状态。2.Aβ25-35诱导的AD细胞模型中,Notch信号通路被激活,导致TFF3降低,引起细胞凋亡。