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【背景】胃癌细胞发生多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致患者化疗失败的最主要原因,也是胃癌复发和转移的重要原因之一。因此,阐明胃癌多药耐药的分子机制和探索逆转耐药的药物靶点成为肿瘤研究领域的一个重要方向。miRNA是近年来发现的一类内源性非编码小RNA分子,其通过与靶基因mRNA的3-UTR区互补结合抑制其翻译或促进其降解,从而实现对多种生物学过程的调节。microRNA广泛参与真核生物的多种生理病理过程,包括肿瘤的增殖、转移和耐药等。let-7f是miRNAlet-7家族成员之一,通常在肿瘤表达中是下调的,被视为肿瘤抑制基因。我们前期研究已经证明了,上调let-7f的表达可以抑制胃癌的侵袭和转移,其可能的分子机制是通过直接抑制转移相关基因MYH-9的表达实现的。大量的研究表明,肿瘤的转移和肿瘤耐药关系密切。故我们大胆预测let-7f可能也参与胃癌多药耐药的调节,目前尚未见有关let-7f参与调节胃癌多药耐药的研究报道,这将是我们下一步的研究重点。【目的】探讨let-7f在胃癌多药耐药中的调节作用及其潜在的分子机制。【方法】1.通过qRT-PCR,比较胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR与其亲本细胞系SGC7901中microRNAlet-7f表达水平的差异。2.采用细胞转染方法,将let-7f mimic转染入耐药细胞SGC7901/ADR中,从而上调let-7f的水平。3.采用MTT法检测SGC7901,SGC7901/ADR及转染let-7f mimic后SGC7901/ADR对不同化疗药物的药物敏感性。4.运用阿霉素蓄积与潴留实验比较耐药细胞系SGC7901/ADR转染let-7f mimic后的药物泵出率。5.利用流式细胞仪(FCM)检测转染let-7f mimic后SGC7901/ADR的凋亡情况。6.通过Western Blot检测P-gp、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达情况。【结果】1. qRT-PCR结果显示,let-7f在SGC7901/ADR细胞中的表达较在SGC7901中的表达显著降低(P<0.05)。2.胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR转染let-7f mimic后,let-7f的表达显著上调(P<0.05)。3. MTT法结果显示,SGC7901与SGC7901/ADR两种细胞阿霉素(ADR)的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.95±0.08)g/L和(5.40±0.28)g/L。上调let-7f的表达可以显著增强耐药细胞SGC7901/ADR对ADR和5-FU的药物敏感性。4.阿霉素蓄积与潴留实验结果表明:SGC7901/ADR细胞转染let-7f mimic后细胞药物泵出率显著降低(P<0.05)。5. FCM凋亡检测结果显示,上调let-7f的表达后,SGC7901/ADR细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。6. Western Blot结果表明,SGC7901/ADR细胞转染let-7f mimic后cleaved Caspase-3及P-gp表达显著降低(p<0.05),而两组中的Bcl-2表达水平无显著性差异(p>0.05)。【结论】let-7f的表达水平在胃癌耐药细胞SGC7901/ADR及其亲本细胞SGC7901中存在显著性差异。上调let-7f的表达可使耐药细胞SGC7901/ADR对化疗药物的敏感性增强。let-7f可能是通过减少药物外排和诱导细胞凋亡,增强耐药细胞对化疗药物的敏感性,进而逆转胃癌MDR。综上所述,本研究证实let-7f参与调控胃癌MDR,这将为寻找新的肿瘤基因治疗靶点奠定理论基础。