清络通痹颗粒对类风湿关节炎破骨细胞分化相关因子表达的影响

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目的:在既往应用清络通痹颗粒(QTL)治疗类风湿关节炎(RA)有效的基础上,拟进一步从分子水平探讨QTL对RA破骨细胞(OC)分化相关因子的影响,为进一步揭示QLT对RA中OC骨吸收的信号通路机制奠定基础。方法:采用外周血单核细胞体外培养法,建立滑膜成纤维细胞-单核细胞共培养模型。将传代至3-5代的关节炎大鼠滑膜成纤维细胞消化,用含胎牛15%的α-MEM制备成浓度为0.5-1.0*10^6/ml的细胞悬液备用,将悬挂式小室置于含有单核细胞混悬液的6孔板上,再将成纤维细胞悬液加入小室内。6孔板置5%C02培养箱中37°C培养,用M-CSF作为诱导剂,诱导生成具有典型OC特征的破骨样细胞(OCL),并进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定。在显微镜下可见:细胞形态清晰,呈不规则形,多核(4-10个不等),苏木素染色呈红色或者棕红色颗粒的部分为TRAP酶活性的部位所在,由此鉴定共培养所生成的TRAP阳性的多核细胞(3核以上)为OCL,符合公认的OC鉴定标准。证明本次实验建立的共培养体系可以成功诱导出具有骨吸收功能的OC。在共培养至第3天、第11天和第21天时,6孔细胞培养板内各组细胞给药,各组设3个平行对照,培养48小时后收集细胞上清液,用于RANKL和IL-34、OPN的测定。将上清于96孔细胞培养板中测定RANKL和IL-34、OPN含量,每组做4个平行对照,方法按照各个试剂盒操作。ELISA法测定含药血清对RA破骨细胞分化因子RANKL及破骨细胞分化相关因子IL-34、OPN的影响。结果:一定剂量的QLT含药血清可抑制RA破骨细胞培养上清中RANKL和IL-34、OPN的含量,使OC分化、增殖活性减弱,这说明QLT对OC的生长有直接的抑制作用。结论:QLT通过抑制RANKL上游分泌的炎症细胞因子(IL-34、OPN等),从而介导RANKL这一OC分化关键因子的过度表达,减轻了RA关节软骨及软骨下骨破坏,延缓骨质破坏的进程。
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