肝脏缺血/再灌注损伤（IRI）是一个急性而又动态的过程。在缺血性阶段,肝脏代谢供需失衡,出现严重的组织缺氧、ATP耗竭,发生氧化应激和内质网应激,产生大量活性氧,致使细胞器损伤,进而启动细胞坏死或凋亡。然而肝功能障碍和衰竭却主要发生在再灌注期。肝IRI一直是临床遏待解决的主要挑战。肝IRI本质上是一种无菌性炎症反应,其中先天性和适应性免疫系统都被激活,但以先天性免疫为主导,并涉及一系列复杂的细胞和分子信号通路。尽管有关肝IRI的知识正在扩大,但损伤信号如何从代谢应激到炎症的转化仍值得关注。巨噬细胞（m?）是先天免疫系统重要成员之一,在肝IRI期间,m?一直被认为是早期缺血后氧化应激和炎症反应的主要贡献者,也是促炎细胞因子的主要来源。但m?在肝IRI过程中可表现出促炎和抗炎的双相反应,称之为极化现象。M1/M2极化在肝IRI中对过度炎症反应产生重大影响。Regnase-1,又名MCPIP和ZC3H12A,因其免疫调节活性受到关注。Regnase-1主要定位于单核细胞和m?中表达,它可识别靶基因特定的二级结构即“茎环”结构,并通过其核糖核酸内切酶（RNase）活性降解一组编码炎症细胞因子的m RNA,因而作为细胞因子信号的抑制因子减轻炎症反应。它是m?活化的负调控因子,对于维持免疫稳态以及防止炎症条件下免疫系统的过度激活至关重要。但Regnase-1在肝IRI中的作用尚不明确。本研究旨在探讨Regnase-1在肝IRI中对炎症反应的抑制作用,以及在其中对m?极化的影响,并在此基础上阐明其潜在机制。1、Regnase-1在肝IRI中调控m?极化的体内研究我们成功地建立小鼠肝IRI模型。与Sham组相比,IRI组的肝功能和Suzuki’s评分均恶化,Clodronate组则明显缓解。经RT-PCR和Western blot分析发现,IRI组中Regnase-1的基因和蛋白表达均明显增加,但在Clodronate组却大幅减退。随后我们证实,Regnase-1主要定位于肝脏m?中表达。Clo+BMDM组中,随着骨髓源性巨噬细胞（BMDM）的输注,其肝脏病损亦再次加重。而在Clo+LV MCPIP BMDM组中,由于输注了慢病毒转染敲除MCPIP基因的BMDM（LV-MCPIP BMDM）,其肝脏病变更加恶化。另外,RT-PCR检测结果提示,MCPIP的敲除更偏向于M1极化。2、Regnase-1在肝IRI中调控m?极化的体外研究我们在体外模拟肝细胞缺氧/复氧（H/R）模型。我们利用LPS刺激BMDM诱导M1极化,IL-4诱发M2极化。流式细胞术检测显示,H/R上清刺激时,BMDM表现出一定程度的M1和M2状态,但以M1为主。但是,对于LV-MCPIP BMDM,LPS刺激时其M1增多,IL-4诱导时M2减少;H/R上清刺激时,其M1/M2比值明显高于BMDM。随后的RT-PCR检测结果提示,LV-MCPIP BMDM更倾向于M1极化。3、Regnase-1通过NF-κB以及C/EBPβ/PPARγ通路调控m?极化的机制研究Western blot分析显示,在体外实验中,H/R上清刺激后,BMDM与LV-MCPIP BMDM的NF-κB p65水平均强化,但BMDM的水平更低。然而,当两组m?都加入了NF-κB抑制剂BAY-11-7082后,其M1/M2标志物和流式细胞学参数的差异消失。而对于体内实验,IRI组的NF-κB p65明显高于Sham组;Clodronate组的NF-κB p65磷酸化水平显著逆转;Clo+BMDM组的NF-κB p65磷酸化再次增强;而在Clo+LV-MCPIP BMDM组中,NF-κB p65表达更加明显。另外,在体外实验中,H/R上清刺激后,BMDM与LV-MCPIP BMDM的CST-PPARγ（C26H12）水平均强化,但BMDM更明显。当两组m?都加入了PPARγ抑制剂GW9662后,其M1/M2的差异也消失。在体内实验中,5组小鼠的CST-PPARγ（C26H12）表达表现出先升高、继而下降、再次上升、最后下降的趋势。同时,C/EBPβ（LAP）的蛋白水平趋势与CST-PPARγ（C26H12）基本相同。总之,Regnase-1对肝IRI有重要的免疫抑制作用。Regnase-1通过调控m?极化参与肝IRI的免疫应答,它的缺失导致m?更倾向于M1极化。机制上,Regnase-1通过抑制NF-κB以及诱导C/EBPβ/PPARγ信号参与M1/M2极化。