【摘 要】
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本文以絮凝基因FLO1为选择性标记构建酵母表达载体，利用该载体克隆并表达了β-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.21)基因，为了使酿酒酵母具有发酵木糖的能力，分别从腾冲嗜热菌(Thermoanae
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本文以絮凝基因FLO1为选择性标记构建酵母表达载体，利用该载体克隆并表达了β-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.21)基因，为了使酿酒酵母具有发酵木糖的能力，分别从腾冲嗜热菌(ThermoanaerobactertengcongensisMB4T)和毕赤酵母(Pichiastipitis)中克隆到木糖异构酶基因(xyloseisomerasegene，XYLA)和木酮糖激酶基因(xylulokinasegene,XKS1)。在酿酒酵母EF326中共表达这两个基因，得到重组菌EF1014。酶活测试结果表明：XYLA和XKS1在EF1014菌株中都得到了很好的表达，而且XYLA在重组菌中仍然具有耐热性，其最适温度为80℃，最适pH值为7.0。在最适条件下，XYLA的酶活可以达到1.0U/mg蛋白。当温度降到60℃以下时，酶活急剧下降。30℃和40℃时的酶活分别为最大值的12﹪和15﹪。EF1014可以在以木糖为唯一碳源的培养基上缓慢生长，而且在厌氧条件下能发酵木糖生产酒精。
本文对EF1014的发酵条件进行单因素试验时发现，在pH5.5的条件下，250mL三角瓶装75mL发酵培养基，10﹪的接种量，50g/L木糖浓度，发酵72hr，得到乙醇的最高产率0.11g/g木糖和木糖最高消耗率28.4﹪。发酵温度从30℃提高到37℃，所得结果没有明显差异。
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