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Graves病（Graves’ disease,GD）是一种主要累及甲状腺的自身免疫性疾病,又称为毒性弥漫性甲状腺肿,好发于30～50岁成人,男女患病比为1:6。患者临床主要表现为弥漫性对称性甲状腺肿大以及功能亢进、胫前粘液性水肿、机体高代谢状态、眼球突出等;病理特征为甲状腺滤泡上皮细胞增生,并伴有淋巴细胞浸润。Th17/Treg细胞水平失衡在Graves病中发挥的重要作用。中医辨证论治有优势。Graves病常见证候为肝郁脾虚,加味逍遥丸（《内科摘要》）疏肝健脾,临床治疗Graves病疗效满意。地乌为林荫银莲花的根茎,临床主要用于治疗自身免疫病;本课题在前期工作基础上,基于Graves病促甲状腺激素受体（TSHR）结构改变导致疾病发生的机制,以地乌配伍加味逍遥丸,观察该衍生方通过调节JAK1-STAT3通路,恢复Th17/Treg平衡治疗Graves病的免疫药效及药理机制。第一部分Graves病大鼠模型建立目的:通过皮下注射甲状腺膜抗原,制备Graves病大鼠模型。方法:提取大鼠甲状腺膜蛋白,同弗氏完全佐剂乳化制备膜抗原。SD雌性大鼠分为空白对照组和9个致敏-发敏梯度时间间隔的造模组,造模组大鼠四肢皮下注射膜抗原,3次致敏,3次发敏。d110进行症状评分,d115进行心电图检测,Elisa检测血清T3,T4,TRAb和IFN-y,HE染色（HE staining）观察甲状腺和脾脏病理变化;GraphPad Prism5软件回归时效方程,确定致敏和发敏时间间隔的半数有效时间（ET50）。结果:指标效能与对数间隔时间回归所得时效曲线呈“S”型,方程为Y=0.03+0.69/[1+10（7.7）x-21.35)],ET50为 587.10h（24 天）。结论:本实验通过确定膜抗原致敏与发敏的最适时间间隔,制备了 Graves病药效模型,该模型符合临床表现与发病机制,可用于候选药的药效评价。第二部分加味逍遥丸衍生方治疗Graves病的药效目的:探究加味逍遥丸衍生方治疗Graves病的药效。方法:96只SD大鼠体重（140-160g,雌鼠）,分为空白对照组、模型组、甲巯咪唑组（MMI,0.0024g·kg-1）、地乌组（DW,0.24g·kg-1）、加味逍遥丸组（FF,3.6g·kg-1）,衍生方低剂量组（QL,1.21g·kg-1）,衍生方中剂量组（QM,3.84g·kg-1）,衍生方高剂量组（QH,12.14g·kg-1）,每组12只。造模动物采用膜抗原免疫复制Graves病模型;d38每日灌胃给药44天。d72-76进行代谢检测,d82检测心电图后处死动物。Elisa法检测大鼠血清T3,T4,TRAb水平。苏木素-伊红染色观察甲状腺病理变化,形态计量甲状腺滤泡上皮细胞增生体积;免疫组化观察甲状腺CD4+和CD8+T细胞浸润。结果:①症状评分:与模型组相比,各给药组大鼠心率、进食量、饮水量、粪便重量、尿量均有减少或降低（P<0.05）,其中QL组心率异常;②血清激素与抗体:与模型组相比,各给药组血清T3、T4、TRAb水平,均有降低（P<0.05）;③病理观察:与模型组相比,各给药组的甲状腺滤泡较小,滤泡上皮增生,滤泡上皮完整。形态计量显示甲状腺滤泡上皮细胞增生体积有减少（P<0.05）;④免疫组化:与模型组相比,各给药组的CD4和CD8原位表达阳性,T淋巴细胞浸润减少（P<0.05）。与甲巯咪唑阳性药相比,衍生方中剂量组改善高代谢状态,降低血清激素T3、T4、TRAb水平,缓解甲状腺滤泡上皮细胞增生,减少T细胞浸润的疗效较佳。结论:加味逍遥丸衍生方改善高代谢状态,降低血清激素T3、T4、TRAb水平,缓解甲状腺滤泡上皮细胞增生,减少T细胞浸润,治疗Graves病。第三部分加味逍遥丸衍生方治疗Graves病的药理机制探索目的:探索加味逍遥丸衍生方治疗Graves病的药理机制。方法:96只SD大鼠体重（140-160g,雌鼠）,分为空白对照组、模型组、甲巯咪唑组（MMI,0.0024g·kg-1）、地乌组（DW,0.24g.kg-1）、加味逍遥丸组（FF,3.6g·kg-1）,衍生方低剂量组（QL,1.21g·kg-1）,衍生方中剂量组（QM,3.84g·kg-1）,衍生方高剂量组（QH,12.14g·kg-1）,每组12只。造模动物采用膜抗原免疫复制Graves病模型;d38每日灌胃给药44天。d72-76进行代谢检测,d82检测心电图后处死动物。Elisa法检测大鼠血清IFN-γ、IL-10、IL-17、IL-21水平;免疫组化观察脾脏 JAK1、STAT3、p-STAT3、RORyt、FOXP3 原位表达;RT-PCR 法检测 JAK1、STAT3的mRNA水平;Western Blot检测脾脏JAK1、STAT3、RORγt、FOXP3蛋白表达水平。结果:①血清细胞因子水平:与模型组相比,各给药组血清IFN-γ、IL-10、IL-17、IL-21水平降低（P<0.05）;与MMI组比较,IFN-γ的DW、QL、QM水平无显著性差异;IL-10的QM、QH组水平无显著性差异;IL-17的QL、QM组水平无显著性差异;IL-21的QM、QH组水平无显著性差异。②免疫组化显示:与模型组相比,各给药组 JAK1、STAT3、p-STAT3、RORyt、FOXP3和RORyt/FOXP3 的原位表达水平降低（P<0.05）;与MMI组比较,JAK1的FF、QM组原位表达水平水平无显著性差异;STAT3的DW、QL、QM组原位表达水平无显著性差异;p-STAT3的QM,QH组原位表达水平无显著性差异;FOXP3的QL、QM组原位表达水平无显著性差异;各组RORγt的原位表达水平和RORyt/FOXP3比例有显著性差异（P<0.05）。③RT-PCR显示:与模型组相比,JAK1 mRNA和STAT3 mRNA表达水平降低;与MMI组比较,QL、QM组的JAK1 mRNA的表达水平无显著性差异;QM组的STAT3 mRNA的表达水平无显著性差异。④Western Blot显示:与模型组相比,各给药组JAK1、STAT3、RORyt、FOXP3和RORyt/FOXP3比例水平均有下降。与MMI组比较,JAK1的FF,QM组表达水平无显著性差异;STAT3的QL、QM组表达水平无显著性差异;RORyt的QM组表达水平无显著性差异;FOXP3的QM,QH组表达水平无显著性差异;RORyt/FOXP3的QM组表达水平无显著性差异。结论:加味逍遥丸衍生方通过抑制CD4+T细胞的JAK1-STAT3通路,调节T细胞分化,恢复Th17/Treg细胞平衡,治疗Graves病。全文结论为探究加味逍遥丸衍生方治疗Graves病的药效及药理初探,使用大鼠甲状腺膜蛋白与完全弗氏佐剂乳化制备膜抗原,构建Graves病大鼠模型;以甲巯咪唑（MMI）为阳性药,比较加味逍遥丸复方、地乌单药、加味逍遥丸衍生方的药效,使用Elisa法检测血清IFN-γ、IL-10、IL-17、IL-21水平,免疫组化、Western Blot和 Real-time PCR 探究 JAK1,STAT3,pSTAT3,ROR γt 和 FOXP3 蛋白表达水平,探究衍生方的药理机制。膜抗原诱导大鼠成功构建Graves病大鼠模型,探究最适膜抗原免疫建模的最佳时效（ET50）约为24天（587.10 h）;分析药效学实验,加味逍遥丸衍生方治疗Graves病的效果最佳;探究其药理机制,加味逍遥丸衍生方与甲巯咪唑阳性药组的作用机制相似,通过抑制CD4+T细胞中JAK1-STAT3通路,调节Th17/Treg细胞平衡,提高Treg细胞的活性,从而治疗自身免疫性疾病。