【摘 要】
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目的应用RNA干扰技术研究重组质粒pEGFR-shRNA对卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP中EGFR基因表达水平的抑制情况,探讨重组质粒作用于卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP后对细胞凋亡的影响。方
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目的应用RNA干扰技术研究重组质粒pEGFR-shRNA对卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP中EGFR基因表达水平的抑制情况,探讨重组质粒作用于卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP后对细胞凋亡的影响。方法构建携带EGFR小发夹干扰RNA(pEGFR-shRNA)的重组质粒表达载体,将其转染SKOV3/DDP细胞。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学法(ICC)检测转染前后细胞内EGFR mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率。结果DNA测序证实EGFR质粒表达载体中shRNA插入序列完全正确。特异性转染后的细胞EGFR mRNA的表达明显受抑制。蛋白质的表达水平显著降低。流式细胞仪检测结果显示：顺铂作用后,特异性转染组细胞周期分布发生明显改变,G0／G1期细胞比例增多,S期细胞比例减少。凋亡率显著升高。结论利用RNA干扰技术设计并体外合成靶向EGFR的序列特异性shRNA转染人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP细胞后可有效抑制SKOV3/DDP细胞中EGFR基因在mRNA和蛋白水平的表达,同时可以促进耐药细胞的凋亡。
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