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目的:研究胆固醇对人肝细胞c反应蛋白(C-reactive protein,CRP)基因表达的影响并初步探讨其机制。
方法:分别以浓度为6.25mg/L,12.5mg/L,25.0mg/L,50.0mg/L的胆固醇作用人肝细胞L-02,采用real-time PCR法检测细胞中CRP mRNA转录情况;Westernblot检测细胞内CRP基因表达;免疫比浊法检测细胞培养液中CRP含量,观察胆固醇对L-02细胞CRP基因表达的影响。NF-KB信号通路的阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine ditiocarbamate PDTC)干预胆固醇作用L-02细胞的反应,比较NF-KB信号通路阻断前后CRP表达量的变化;用荧光分光光度计测定胆固醇刺激细胞后细胞内第二信使钙离子浓度变化情况,初步探讨胆固醇诱导CRP基因表达的分子机制。
结果:胆固醇能诱导人肝细胞C反应蛋白的表达(P<0.05),其诱导效应随浓度增加而增强,同时细胞内钙离子浓度随胆固醇剂量的增加而增大(P<0.05),加入PDTC阻断NF-KB信号通路后,胆固醇诱导人肝细胞CRP基因表达的作用减弱(P<0.05)。
结论:胆固醇能诱导人肝细胞CRP基因表达,其机制可能与上调细胞内钙离子浓度有关;PD3℃阻断NF-KB信号通路后,CRP表达量下降,提示NF-KB信号通路参与了胆固醇诱导CRP基因表达的过程。