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生长素响应因子ARF(auxin response factor)是一类转录因子,通过调控生长素响应基因的表达来调节植物生长发育。ARF4是ARF家族成员,目前关于ARF4基因的研究仅局限于拟南芥和番茄等植物,在草莓中的相关研究报道甚少。本文通过构建FaARF4-GFP载体来明确FaARF4蛋白的细胞定位。通过构建草莓FvARF4基因沉默载体,旨在进一步明确ARF4基因缺失对草莓植株生长发育的影响。主要结果如下:1.首先从二倍体‘Ruegen’草莓中扩增FvARF4基因编码区序列,全长为2409bp,编码802个氨基酸。与二倍体森林草莓基因组中对应序列相似度为99.79%;与八倍体栽培草莓FaARF4氨基酸序列一致性为99%。通过序列分析选择333bp特异性序列作为构建沉默表达载体的目的片段,并分别扩增正反沉默片段。2.通过SYBR染料法qRT-PCR检测了森林草莓‘Ruegen’不同器官中ARF4的相对表达量,结果显示在叶柄、花和叶中ARF4的表达量最高,在根和果实中次之。3.利用实验室已有的八倍体‘艳丽’草莓FaARF4编码区全长序列,扩增不含终止子的2400bp的FaARF4序列。以pRI101-GFP为骨架载体,以XbaⅠ/SalⅠ为酶切位点,成功构建ARF4-GFP融合载体。对ARF4蛋白进行亚细胞定位,发现其定位在细胞核内,属于核蛋白。4.以pART27为表达载体、pKANNBAL载体为中间载体,利用XhoⅠ/EcoRⅠ和HindⅢ/XbaⅠ为酶切位点,首先将长度333bp的ARF4正反沉默片段插入连接到pKANNBAL上。然后利用NotⅠ进行单酶切,将带有ARF4沉默片段的序列与pART27载体连接,最终成功构建草莓FvARF4基因沉默载体,命名为pRNAi-ARF4。5.采用农杆菌介导的‘叶盘法’侵染草莓叶片,将pRNAi-ARF4载体侵染到二倍体森林草莓‘Ruegen’中。通过SYBR染料法qRT-PCR定量检测转基因植株中ARF4的相对表达量,结果显示在6株转基因植株中ARF4表达量均明显下调。6.通过表型观察,发现FvARF4基因沉默植株叶片形态没有发生明显变化,而表现出晚花现象和花发育缺陷:花瓣不能完全展开。转基因植株中果实发育易出现畸形,并且这些表型能够遗传到T1代植株中。在观察T1代植株根系时发现FvARF4基因沉默T1代植株的侧根数显著少于对照。7.通过检测转基因植株中表型相关基因的表达量,发现AP1,FT,SOC1和SPL3的表达量下降,FUL和ARF3的表达量没有明显变化。推测ARF4可能通过调控上述基因发挥作用。