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柠条锦鸡儿(CaraganakorshinskiiKom.)是豆科(Leguminasae)锦鸡儿属(Caragana)多年生落叶灌木。它是一种抗寒、耐旱、耐盐碱、耐贫瘠,适应性很强的防风固沙树种,其茎、叶和种子中均含有丰富的营养物质,一般作为干旱地区牲畜的饲料或饲料的添加成分;籽油在民间有用药历史,一般用于杀虫止痒、治皮炎和脓疱疮。目前,国内外对柠条锦鸡儿的研究主要集中在分类学、植物区系分布、植物资源的开发利用(饲用)、造林技术、水土保持效益、抗旱性、水分生理等方面,尚未见对柠条锦鸡儿种子成分及抗皮肤癣菌活性的报道。
本文以西宁地区栽培种柠条锦鸡儿为研究对象,分析了柠条锦鸡儿种子成分及籽油的抗皮肤癣菌活性,主要内容及实验结果如下:
1.对柠条锦鸡儿花、茎、叶和种子中的灰分、粗脂肪、粗蛋白及总糖等基本营养成分含量进行测定并对结果进行评价,结果表明柠条锦鸡儿具有较高的营养价值,是开发利用的优质资源。
2.建立了以2,4-二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生化反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定柠条锦鸡儿种子中17种氨基酸含量的方法;并采用高效液相色谱法(HPLC)对籽油中的维生素E含量进行测定。17种氨基酸含量达到15.50mg/g,其中必需氨基酸含量占总氨基酸含量的44.60%;总维生素E含量为1.09mg/100g,有效维生素E含量较一般饲料高。
3.在单因素实验基础上,采用响应面法优化了种子中总黄酮的提取工艺。得到了最佳提取工艺:提取温度71℃、液固比24:1、乙醇浓度83%、提取时间2.4h下,总黄酮提取得率达到0.93%;利用电感耦合等离子质谱仪(ICP-MS)、电感耦合等离子发射光谱仪(ICP-AES)和原子荧光光度计(AFS)对柠条锦鸡儿各部位中9种矿质元素含量进行测定,旨在获得更全面的柠条锦鸡儿成分信息。
4.以单因素实验结果为依据,采用超临界CO2流体萃取技术萃取柠条锦鸡儿籽油,并运用正交实验分析萃取条件包括萃取压力、温度和时间对实验的影响,得到最佳萃取工艺为萃取温度55℃,萃取压力25MPa,萃取时间60min;采用柱前衍生反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分析柠条锦鸡儿籽油的组成。发现柠条锦鸡儿籽油主要由不饱和脂肪酸组成,含量达到71.84%,其中亚油酸与油酸含量较高,分别为51.79%和17.03%。采用国标中的测定方法对柠条锦鸡儿籽油的各理化指标进行分析,结果表明超临界CO2萃取的柠条锦鸡儿籽油各理化指标均符合相关标准。
5.参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性实验方案》(M38-A)测定柠条锦鸡儿籽油对三种临床常见的皮肤癣菌犬小孢子菌、须癣毛癣菌和红色毛癣菌的最低抑菌浓度(MIC);并采用高效液相色谱法(HPLC)分析柠条锦鸡儿籽油对真菌细胞膜麦角甾醇合成的影响,以探讨籽油对皮肤癣菌作用机制。同时将籽粕70%乙醇提取物的抗皮肤癣菌活性与籽油对比。结果表明柠条锦鸡儿籽油对犬小孢子菌、须癣毛癣菌和红色毛癣菌的MIC范围分别为64~512μg/mL、32~512μg/mL和64~1024μg/mL;另外,柠条锦鸡儿籽油主要是通过影响细胞膜上麦角甾醇的合成而发挥抑菌作用的。
本工作为柠条锦鸡儿的进一步开发利用提供了基础实验数据和理论参考。柠条锦鸡儿含有较丰富的营养,是青藏高原荒漠地区牲畜饲料的优质资源;其籽油具有抑制皮肤癣菌生长的活性,可以开发为治疗皮肤癣的药物。