论文部分内容阅读
[研究背景]目前认为,慢性病贫血(ACD)的发病机制是由原发病启动的免疫反应所介导：异常升高的炎性细胞因子主要是IL-6通过上调肝脏hepcidin,导致铁利用障碍,引发贫血；此外,可直接抑制红系前体细胞增殖分化,缩短红细胞寿命,钝化对EPO的反应,干扰铁代谢相关蛋白的转录等导致慢性病贫血。单核细胞是慢性病贫血中产生炎性细胞因子的主要来源,同时是铁储存细胞,接受hepcidin的调控,在ACD的发病中发挥关键作用,近年来研究显示,单核细胞与肝脏相似,受到炎症刺激后hepcidin mRNA表达明显增加。单核细胞的hepcidin也对铁代谢有调节作用,同时在ACD患者中表达升高,与贫血和升高的IL-6明显相关,显示其可能在患者体内参与ACD的发病。促红细胞生成素(EPO)是目前治疗ACD的主要手段,通过与EPO受体结合刺激造血、抑制肝脏hepcidin以及降低炎症因子等发挥治疗作用。但是EPO降低hepcidin的具体机制尚不清楚,其降低肝脏hepcidin可能与下调C/EBPa,抑制STAT3的磷酸化有关；但是否存在其他的信号途径、对单核细胞hepcidin是否也有类似的降低作用和分子机制并不清楚,此外,EPO降低前炎症因子的机制也并不清楚。多发性骨髓瘤和非霍奇金淋巴瘤是肿瘤相关ACD的代表性疾病,骨髓瘤患者血清和尿hepcidin水平升高,非霍奇金淋巴瘤则缺乏相关研究。对于这两种疾病,单核细胞hepcidin是否升高,是否在ACD中发挥作用,尚不清楚。[研究目的]1观察EPO是否能降低单核细胞hepcidin并探讨其分子学机制。2探讨EPO降低IL-6的分子机制。3探讨单核细胞hepcidin在MM和NHL患者相关ACD中可能发挥的作用。[研究方法]1 IL-6诱导THP-1单核细胞,Real time PCR法检测hepcidin;加入EPO,观察其对hepcidin的影响。Western blot免疫印迹法检测hepcidin蛋白及信号分子：C/EBPa、Smadl/5/8、P-Smad1/5/8及P-STAT3,加入EPOR抗体,观察对EPO的拮抗作用。2 LPS诱导THP-1单核细胞和人原代单核细胞,Real time PCR法检测IL-6及TNF-a表达。Western blot法检测信号分子PARP-1,加入EPOR抗体或PARP-1抑制剂3AB,观察对EPO的拮抗作用及信号蛋白的影响。3收集多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤患者的临床资料及血清,ELISA法检测患者血清IL-6及TNF-a的浓度。4磁珠分选法分离外周血CD14+单核细胞,Real time PCR实时定量法检测单核细胞hepcidin、IL-6、TNF-a及C/EBPa的表达。[结果]1 EPO可降低IL-6诱导的THP-1单核细胞hepcidin mRNA表达及蛋白量：同时降低C/EBPa、P-Smad1/58、P-STAT3, EPOR抗体可拮抗EPO对hepcidin及信号蛋白的影响。2 EPO可降低LPS诱导的THP-1细胞和人原代单核细胞IL-6和TNF-a的表达,同时降低PARP-1的蛋白量,EPOR抗体及3AB均对可拮抗EPO对IL-6及PARP-1的下降作用。3 MM患者单核细胞hepcidin的表达高于正常,初治者与Hb、TSAT%负相关,与SF、体内IL-6水平、CRP及β2微球蛋白正相关,与体内TNF-a水平、LDH无关联。单核细胞CEBPa表达与hepcidin水平正相关。4 NHL患者单核细胞hepcidin表达高于正常,初治组与Hb负相关,与体内IL-6水平、CRP、LDH正相关,与TSAT%、SF及体内TNF-a水平无关联。单核细胞CEBPa表达与hepcidin水平无关。[结论]1 EPO可从基因水平和蛋白水平明显降低IL-6诱导的单核细胞hepcidin;其可能的分子机制：通过与EPOR结合,降低信号分子C/EBPa,减少Smad1/5/8及STAT3磷酸化。2 EPO可明显降低LPS诱导的单核细胞IL-6和TNF-a mRNA的表达,EPO可能是通过与EPOR结合,抑制信号分子PARP-1,实现对IL-6的下调作用。3多发性骨髓瘤和非霍奇金淋巴瘤患者单核细胞hepcidin mRNA表达升高,在初治患者中与血红蛋白存在关联,可能是导致其ACD的原因之一；单核细胞hepcidin mRNA表达升高可能是由患者体内升高的IL-6所诱导。CRP或LDH可能反应初治患者体内hepcidin的水平。