Lipocalin型前列腺素D合成酶（Lipocalin-type Prostagladin D Synthase,L-PGDS）亦称β-trace蛋白,是机体组织屏障的主要成分,属Lipocal in家族。L-PGDS主要分布于哺乳动物的中枢神经系统和雄性生殖器官,并分泌至脑脊液、血清、精液、尿液、羊水等体液中。L-PGDS是一种双功能蛋白,除催化PGD₂产生外,亦可结合和运输亲脂/疏水分子。该蛋白具有广泛的生理学作用,它不仅与睡眠诱导、体温调节、感受伤害、气味应答等有关,亦是一种生育相关蛋白,可能参与精子的发生和成熟。研究表明,L-PGDS与许多疾病密切相关,如L-PGDS不同程度地表达于卵巢癌、乳腺癌等组织,病毒性脑膜炎、脑脊膜瘤、椎管狭窄、脑栓塞等病人的CSF中L-PGDS明显升高。 为了建立L-PGDS的免疫学检测方法并探讨其在男性生殖系统中的具体功能、代谢过程、作用机制以及与男性不育的关系等,本实验室以毕赤氏酵母表达了人睾丸L-PGDS抗原,成功制备了兔抗人L-PGDS多克隆抗体和鼠抗人L-PGDS单克隆抗体。兔源多抗实际上是多种抗体的混合物,具有不均一性,无论是对抗体分子结构与功能的研究还是临床应用都受到很大限制;而特异性鼠单抗具有异源性,应用于人体研究会引发人抗鼠抗体的毒性反应,并使抗体在体内消除加快等。因此,应用于临床的理想抗体应是人源的,但人一人杂交瘤技术目前尚未突破,且还存在人-人杂交瘤体外传代不稳定、抗体亲合力低及产量不高等问题。目前解决此问题的较好办法之一是研制基因工程抗体,代替鼠源单抗应用于临床。本研究试利用基因工程技术,构建和表达目前研究较多也较成熟的单链抗体、人—鼠嵌合抗体,为L-PGDS的功能性研究以及临床相关疾病的诊断、治疗奠定基础。 本研究第一部分首先采用RT-PCR技术,以一组自前导序列的简并引物,从1株稳定分泌抗人L-PGDS单抗的鼠杂交瘤细胞中扩增出抗体的轻链可变区基因2个、重链可变区基因1个:然后分别克隆至pGEM-T载体,并测序。测序结果表明,其中1个V k为鼠骨髓瘤细胞系中固有的无功能基因:另一V k和VH经KabatIg比对分析,与其同源性较高的序列均为鼠免疫球蛋白可变区基因,且碱基序列符合鼠抗体可变区特征。 本研究第二部分利用一柔性连接短肽[（Gly）₄Set]₃,SOE PCR法将上述重、