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Periaxin是施旺细胞中特异表达的蛋白质。在外周神经系统发育过程中,Periaxin蛋白在髓鞘的成熟与维护中发挥重要作用。Periaxin的基因缺失或突变可以引起脱髓鞘型腓骨肌萎缩症(CMT)4F亚型的发生。由于mRNA不同的剪切方式,Periaxin基因产生L-Periaxin和S-Periaxin两种不同的蛋白剪接体。人类L-Periaxin蛋白含有1461个氨基酸,含有四个结构域包括PDZ结构域、NLS结构域、重复结构域及C端酸性氨基酸结构域。其中PDZ结构域为重要的蛋白相互作用结构域,可能参与Periaxin蛋白二聚体的形成,NLS为核定位信号区,介导Periaxin蛋白的核输入及与DRP2蛋白的相互作用,重复序列和酸性结构域的功能未见相关报道。 Ezrin作为一种细胞膜与细胞骨架的连接蛋白,属ERM蛋白家族成员,主要负责将细胞外信号分子传递到骨架蛋白相连接的重要联系分子,激活相应的信号通路、调控细胞的形态构成、黏附、吞噬、运动、血管形成等,Ezrin蛋白与肿瘤发生、发展,特别是肿瘤的转移关系密切,被认为是肿瘤转移的关键调节因子。Ezrin蛋白全长有585个氨基酸,包含3个结构域:分别是N端由296个氨基酸组成的FERM结构域,该结构伸向细胞膜能直接或间接与胞膜连接,直接连接是直接绑定到单跨膜结构域目标蛋白的胞质尾上,包括结合CD44、CD43、CD95、ICAM-1、-2、-3及syndecan-2等,间接结合的蛋白包含多个跨膜域,如CFTR,Na/K逆向转运蛋白,需要接头蛋白含有至少一个PDZ结构域,PDZ结构域可以介导膜上的蛋白聚集;紧接其后的中间部分为延伸的α螺旋结构域,其功能尚未明确;另一端有34个氨基酸组成的带正电的羧基端(C端)F型肌动蛋白结合区,该区伸向胞浆,在该区内有1个苏氨酸残基(Thr567),是Ezrin最重要的磷酸化活化位点。 小鼠六角形晶状体纤维细胞的各连接点上Periaxin成簇聚集,与ankyrin-B、spectrin、NrCAM、filensin、ezrin和desmoyokin等膜蛋白共同组成一个高分子复合物,该复合物的形成对于晶状体纤维细胞的正确聚集、分布及形态的维持等方面均具有重要作用。 本文首先通过免疫共沉淀、GST-Pull-Down实验从不同角度验证了L-Periaxin(1-1461)与Ezrin(1-585)之间的相互作用。然后将L-Periaxin与Ezrin的全长及不同截短型分别克隆到带有两种不同颜色荧光蛋白(GFP或RFP)的载体中,共转染到Hela细胞中过表达带有荧光的融合蛋白,用细胞内荧光共定位检测L-Periaxin与Ezrin两者的相互作用。最后利用黄色荧光蛋白(YFP)的特性作为报告基因,将其分割成2个不具有荧光活性的分子片段,将这两个互补片段分别与L-Periaxin与Ezrin的全长及不同截短型融合表达,检测L-Periaxin与Ezrin两者的相互作用及具体作用的区域确定。结果表明,L-Periaxin蛋白与Ezrin蛋白之间存在相互作用,其可能的作用方式为L-Periaxin(1-200)与Ezrin(1-296)之间,L-Periaxin(1060-1461)与Ezrin(475-585)之间所构成的“头对头”与“尾对尾”的作用方式。