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本研究以豫西土犬为实验材料,对犬精液冷冻及其人工授精的几个主要环节进行研究,以期改进犬冻精的品质和提高犬冻精人工授精的受胎率,主要内容包括: (1)豫西土犬采精方法及精液晶质参数 分别采用假阴道法和改进的按摩法采集公犬精液20次和164次,采精成功率分别为75%和87.8%,并首次建立了豫西土犬的射精量、活率、密度、pH值及顶体完整率等精液品质参数。 (2)稀释液和冻精剂型对犬冻精冻后活率的影响 采集6条公犬的浓份精液36次,分别在稀释液Ⅰ和Ⅱ中冷冻成三种剂型(颗粒、0.5ml细管和安瓿),根据解冻后活率比较优劣。研究表明,稀释液Ⅰ中三种剂型的平均解冻后活率(0.35±0.04)显著高于稀释液Ⅱ(0.23±0.05;P<0.01);两种稀释液中颗粒冻精的平均冻后活率(0.34±0.08)显著高于细管(0.26±0.09;P<0.01)和安瓿(0.25±0.08;P<0.01),细管和安瓿冻后活率差异不显著(P>0.05)。 (3)炸熏法冷冻犬颗粒精液 采集6条公犬的浓份精液共35次,分别将每次采得的精液稀释平衡后分成相等的2份,用两种不同的方法冷冻:一种是炸熏法,将精液直接滴入液氮,在其中“炸”5~8s后将颗粒取出,继续在液氮面上方2cm处熏蒸6min;另一种是常规的氟板冷冻法。炸熏法和氟板法冷冻的精液,平均冻后活率分别为0.385±0.022和0.331±0.042(P<0.01);平均复苏率(%)分别为53.57±3.55和45.75±1.91(P<0.05);平均顶体完整率(%)分别为44.60±3.10和39.37±5.29(P<0.05)。结果表明,炸熏法的冷冻效果显著优于氟板法。 (4)程序控温仪冷冻犬细管精液 分别将6条公犬每次采集的精液(每条采6次),按同样的方法稀释、平衡、分装,而后将分装的细管分为两组,分别采用程序Ⅰ和程序Ⅱ进行冷冻,其冻后活率分别为0.47±0.10和0.34±0.05(P<0.01);复苏率分别为57.86±8.85和42.27±3.80(P<0.01);顶体完整率分别为34.47±5.20和29.77±4.37(P<0.01)。结果表明:程序Ⅰ的冷冻效果明显优于程序Ⅱ。 (5)颗粒冻精的人工授精 用自制的输精管和“炸熏法”获得的颗粒冻精为两组母犬输精,阴道输精组和子宫输精组的受胎率分别为20%和57.1%。研究表明,母犬的最佳输精部位是子宫内,“炸熏法”冷冻的颗粒精液以及两种自制输精管中的一种可以应用于母犬的人工授精。