我国产意大利蜂蜂毒多肽的分离纯化、结构鉴定、活性测定以及固相合成研究

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蜂毒毒素是我国传统中药的宝贵资源,中医认为它具有祛风、止痛、平喘的功效,可用于治疗风湿、类风湿性关节炎,神经炎,皮肤病等疾病。近年来,还有蜂毒制剂用于治疗老年痴呆及抗抑郁的专利报道。现已证明,蜂毒具有多种药理活性:在中枢神经系统中有抗胆碱活性,镇静和镇痛作用;在呼吸及心血管系统中可产生呼吸加快、扩张血管、降低血压、抗心律失常、改善冠状动脉供血和微循环的作用;还具有抗炎、抗菌、溶血、抗凝血、抗病毒以及防辐射等作用。蜂毒毒素已经被证明是多种离子通道的配体,是阐明多种离子通道的结构和功能的有力工具。目前,蜂毒多肽组分在我国已经成为上市药物,用于治疗风湿类疾病和周围神经炎。为研究考察我国产意大利蜂(Apis mellifera)蜂毒成分、寻找新型的离子通道配体以及高效低毒的活性多肽,本文对蜂毒毒素的化学成分进行了研究,并初步测定部分多肽对钠和钾电流的影响。1.综合运用多种色谱技术,从我国产意大利蜜蜂(Apis mellifera)蜂毒中共分离得到10个蜂毒毒素,通过FTICR等质谱、氨基酸分析、Edman降解等方法确定了这些蜂毒毒素的一级结构,其中3个为新的蜂毒毒素,分别命名为melittin F1, secapin-1和secapin-2。secapin-1、secapin-2与已知多肽secapin的区别主要集中在第4位,第16位及第19位氨基酸残基上。2.另有5个蜂毒毒素通过测定LC-ESI-Q-TOF的二级质谱数据并结合数据库检索得到鉴定,分别命名为melittin F2, melittin F3, melittin F4, melittin及melittin-G,其中melittin为已知多肽,其它4个多肽尚无天然存在的报道。3.应用HPLC/FTICR-MS分析技术,建立了蜂毒的多肽指纹图谱。并对其中多肽的分子量进行了归属。结果表明此种蜂毒中多为小分子量多肽,分子量范围主要在1000-3500之间。能检测到的分子量大于5000的多肽数量较少。结合分离得到的多肽纯品信息和相关文献及应用HPLC/FTICR-MS分析获得的HRMS信息,指认了蜂毒中多肽成分指纹图谱中9个主要色谱峰。4.电生理活性测定发现3个已知蜂毒毒素secapin, Api m6.01, Api m6.03对钠、钾通道有一定的作用。5.通过固相合成的方法合成并纯化得到C端酰胺化的secapin-1新多肽。
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