我国食管癌发病率和死亡率极高,患者占到全球的55%左右,严重威胁人民的生命健康。随着化疗及手术治疗手段的进步,食管癌患者死亡率有所下降,但手术化疗往往伴随着很多并发症和毒副作用。中药复方具有多靶点的特点,在抑制肿瘤的同时还可以调节患者的免疫功能、改善患者生活质量、延长生存期。冬凌草为传统中药材,具有清热解毒、活血止痛、消肿散结等功效,临床上常用于食管癌的辅助治疗。本文根据食管癌常用中药临床使用情况,结合课题组前期对冬凌草的研究,拟定了冬凌草为君药、半枝莲为臣药、人参为佐药、甘草为使药的抗食管癌复方;采用药理学和分子生物学方法研究冬凌草复方的配伍作用,结合生物信息学技术RNA-Seq初步探讨冬凌草复方的作用途径及靶点。主要研究内容包括以下四部分:1.冬凌草复方配伍作用的研究。利用MTT法检测冬凌草复方、君臣、君臣佐及单味药材对食管癌细胞增殖的抑制作用,并采用q-PCR法检测其对细胞中免疫因子的调节作用。实验结果表明冬凌草复方、君臣、君臣佐及单味药材均可以抑制食管癌细胞EC109和AKR的增殖,也可以下调EC109细胞中的IL-6、TNF-α及TGF-βm RNA的表达。单味药材及冬凌草复方配伍作用于食管癌细胞72 h时,冬凌草对食管癌细胞EC109和AKR的抑制作用最强(IC50为116.00±4.89μg/m L、115.87±4.95μg/m L),半枝莲次之,人参和甘草对食管癌细胞增殖的作用较弱。君臣、君臣佐、冬凌草复方虽然对食管癌细胞的抑制作用弱于冬凌草(作用于EC109细胞的IC50分别为223.71±20.71μg/m L、240.29±11.42μg/m L、302.23±32.16μg/m L;作用于AKR细胞的IC50分别为273.48±22.22μg/m L、300.68±36.36μg/m L、324.31±21.73μg/m L),但其免疫调节作用明显强于单药作用。2.冬凌草复方抗食管癌作用机制的初步研究。使用q-PCR研究冬凌草复方对DNA甲基化与去甲基化转移酶的调节作用,并采用转录组测序技术RNA-seq检测冬凌草复方抗食管癌的作用靶点及作用通路。q-PCR实验结果表明冬凌草复方可以下调DNA甲基化酶DNMTs的表达,不能上调去甲基化酶TET2的表达。RNA-seq筛选出对照组和冬凌草复方组之间的差异表达基因共2911条,其中1324条上调,1587条下调。综合差异基因GO和KEGG分析,结果显示冬凌草复方可能通过影响Nqo1、Gpx2、Gpx2、Gsta3、Gclc、Hmox1、Mmp10等基因调控细胞周期、铁死亡、p53信号通路、TNF信号通路、HIF-1信号通路、谷胱甘肽代谢、自噬等信号通路进而发挥抗食管癌作用。3.冬凌草复方的体内毒性研究。用急性毒性实验检测冬凌草复方的体内毒性,并用具有免疫功能的C57BL/6小鼠构建同种皮下食管癌移植瘤模型。实验结果显示冬凌草复方最大剂量（5 g/kg）给药后14天,小鼠的体重、脏器组织及脏器指数均无明显变化。4.冬凌草复方指纹图谱的初步研究。采用高效液相色谱法建立冬凌草复方的指纹图谱,对冬凌草复方中的单味药材及主要成分进行识别。在冬凌草复方的HPLC指纹图谱中指认出冬凌草甲素、冬凌草乙素、野黄芩苷、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1等常见成分,识别出冬凌草复方与冬凌草共有峰3个、与半枝莲共有峰5个、与人参共有峰7个、与甘草共有峰4个。本文从中医的祛邪与扶正理论治疗肿瘤的角度出发,研究了冬凌草复方配伍抗食管癌作用,并从RNA水平上初步探讨冬凌草复方的作用途径及靶点。实验结果为研究冬凌草抗癌复方的配伍作用和探索中药复方药效评价体系提供实验基础。