背景:Ⅰ型糖尿病（type 1 diabetes,T1D）是T细胞介导的自身免疫性疾病。研究发现胰岛素原（proinsulin,PI）是T1D启动阶段首要自身抗原,在提呈抗原时,静息的抗原提呈细胞（antigen-presenting cells,APCs）可诱导T细胞免疫耐受,而APCs源自造血干细胞（hematopoietic stem cells,HSCs）。此外,在前期非靶向性慢病毒载体（lentivirus vector,LV）获得成功基础上以及由于MHC II选择性表达于APCs并高表达于分化成熟后树突状细胞,构建靶向性LV,其介导的PI基因表达受控于鼠MHC II启动子,将PI基因靶向表达于静息APCs。后续可将其构建好的靶向性载体转入到4周龄~5周龄的非肥胖型糖尿病小鼠（non-obese diabetes mice,NOD鼠）（即前趋糖尿病阶段的小鼠）中,从而在T1D的启动阶段重建NOD鼠的免疫耐受以达到防治T1D的目的。本实验主要通过构建靶向性表达PI的慢病毒载体,为T1D等自身免疫性疾病的治疗提供载体工具目的:构建靶向性表达胰岛素原（PI）的慢病毒载体,使PI基因靶向表达于静息APC。方法:在非靶向性病毒载体的基础上通过基因工程合成靶向性慢病毒载体（p CDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP）,将目的基因PI用T4 DNA Ligase连接到该病毒载体,经转化、提取及包装后获得相应的病毒液,再将其感染从6-8周的NOD雌鼠提取的并经磁珠分离的造血干细胞,最后与非靶向性慢病毒载体的结果进行比较,评估两种慢病毒载体的感染效率。结果:1、改造慢病毒载体骨架,成功构建了靶向性病毒载体,并用293T细胞包装获得过表达PI的CMV.PI LV和特征性表达的H2-Eα.PI LV;2、分离得到的HSCs细胞,CMV.PI LV和H2-Eα.PI LV病毒均可感染。