选择标记基因在筛选转基因阳性植株过程中是必不可少的，但为了保证转基因产品的安全性，打消人们对选择标记基因安全性的担忧，转基因植物安全评价中要求转基因产品中的选择标记基因必须要去除，培育无选择标记基因的转基因植物以成为当前研究的热点之一。另外，多基因复合性状转基因产品的研发也是转基因技术发展的趋势。因此，本研究构建了多基因表达的双T-DNA植物表达载体，并通过农杆菌介导法导入烟草NC89中，分析多基因表达和共转化效率，为无选择标记多基因表达转基因植物的获得提供有用的工具和技术平台。具体试验结果如下：1）以pCAMbia2300为基础载体，构建了含有两个T-DNA区的双T植物表达载体。载体中两个T-DNA区成左-右-左-右方式排列，而且每个T-DNA区都含有同尾酶多克隆位点，命名为DT2300。2）利用同尾酶技术将选择标记基因nptII表达盒添加到DT2300的一个T-DNA上，然后依次将目标基因bt、hptII、cp4、bar、gus、gfp表达盒添加到另一个T-DNA区上，构建了一系列含有不同数目的目的基因表达盒的双T-DNA植物表达载体DT1、DT2、DT3、DT4、DT5、DT6、DT7（DT1～7是分别含有1～7个基因表达盒的载体）。为了避免调控序列相同而引起的基因沉默现象，其中目的基因nptII、bt、gfp表达盒以启动子35s驱动，目的基因cp4、gus表达盒以启动子nos驱动，目的基因bar、hptII表达盒以启动子cab5驱动。通过农杆菌介导法将构建的一系列载体导入烟草中，获得了含有不同载体的转基因植株DT1：7株，DT2：15株，DT3：10株，DT6：7株，DT7：27株，通过对DT7（含有7个基因）转基因烟草进行PCR检测，证明外源基因已整合到烟草基因组中。3）DT7载体转基因烟草PCR检测结果表明：27株转基因烟草中，只含有1个T-DNA区的有6株，同时含有两个T-DNA区整合的转基因植株有21株，两个T-DNA共转化的效率为77.8%。4）同时含有两个T-DNA区整合的21株转基因植株中，两个T-DNA区随机整合在烟草基因组中的有15株，其中单拷贝转基因植株有9株。在这21株转基因烟草中有12株含有完整的7个目的基因，9株有不同程度的基因缺失，其中大部分缺失都发生在靠近左边界附近。对这12株含有完整七个基因的转基因烟草基因组进行分子检测，发现两个T-DNA区被识别为一个T-DNA区一起整合到植物基因组中的有6株，两个T-DNA区随机整合到基因组中的共有6株。