凋亡蛋白嵌合表达、纯化和生物活性的研究

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细胞凋亡(apoptosis),又称细胞程序死亡(programmed cell death,PCD),是机体主动程序化地导致细胞死亡的过程。1979年在日本发现的鸡贫血病毒(chicken anemiavirus,CAV)的VP3基因表达的凋亡蛋白(apoptin)能够选择性地诱导肿瘤细胞或转化细胞凋亡,对正常细胞无影响。如果能够将凋亡蛋白通过基因工程或基因治疗的方法运用到抗肿瘤治疗方面,具有重要的理论和实践意义。 将已构建成功的 TAT—apoptin-pET28b、hC—SOD3-apoptin-pET28a和Arg9-apoptin-pET43.1所表达的蛋白经过Western Blot鉴定正确后,进行表达优化(温度、时间和诱导剂浓度)、高密度发酵(OD600分别到达42.8,47.2和72.5)和Ni-NTA纯化(蛋白纯度分别达到92%、91%和94%)。纯化后的三种蛋白药物经过透析、无菌过滤后进行肿瘤细胞体内外凋亡实验。MTT实验证明三种蛋白药物的IC5o分别为36μg/ml、105μg/ml和293μg/ml。体外抑瘤率实验证明三种蛋白药物的抑瘤率分别为35.87%、40.22%和38.04%。三种药物均具有较好的抑制肿瘤生长的效果。
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