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目的:通过对菲律宾蛤仔GP结构与性质的研究,为其抗肿瘤作用机理的研究提供一定的基础数据,并综合利用贝类资源为研究新型的功能性食品提供理论基础。本文以菲律宾蛤仔全脏器为原料,对其糖蛋白进行了初步研究,探讨了菲律宾蛤仔糖蛋白的制备工艺 ,并对其组成生理活性进行了研究。菲律宾蛤仔全脏器经热水煮提、透析、冷冻干燥得到菲律宾蛤仔糖蛋白粗品,粗品经DEAE-52-纤维素、Sephadex-G100柱层析分离纯化,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳对纯化所得的级分进行分析来鉴定其相对纯度较高。
采用改良的MTT法检测菲律宾蛤仔糖蛋白对体外肿瘤细胞的抑制作用和对细胞免疫功能的影响。采用HPLC对纯化的级分进行了单糖组分检测,改良的苯酚-硫酸法和Folin-酚法测总糖、总蛋白质的含量,IR确定其特征基团,SDS-PAGE法测定其相对分子质量。
结果与结论:⒈本文首次以菲律宾蛤仔全脏器为原料分离提取出菲律宾蛤仔糖蛋白,菲律宾蛤仔糖蛋白经DEAE-52-纤维素、Sephadex-G100柱层析分离纯化可得二个主要组分:中性糖蛋白GP-1,酸性糖蛋白GP-2,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明其相对纯度较高。
2. GP-1相对分子质量为35000Da,总糖含量60.5%,蛋白含量18.2%,HPLC糖组成分析表明其糖链部分主要是由木糖、葡萄糖、半乳糖组成,IR分析表明其含有多糖的-OH,-COO-1,-NH,-C-O-C等特征基团。
3.GP-2相对分子质量为43000Da,总糖含量57.4%,蛋白含量22%,HPLC糖组分分析表明其糖链部分主要由葡萄糖、半乳糖、木糖、核糖、阿拉伯糖组成,IR分析表明其含有多糖的-OH,-COO-1,-NH,-C-O-C等特征基团。
4. 菲律宾蛤仔糖蛋白纯化级分GP-1和GP-2对K-562细胞杀伤作用不强,表明糖蛋白对K562细胞体外可能不具备直接的杀伤作用
5.体外免疫试验结果证明GP-1,GP-2对细胞免疫具有较好的增强作用,推测糖蛋白抑制肿瘤可能是通过提高机体免疫力来实现的。