【摘 要】
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狂犬病是由狂犬病病毒（rabies virus,RABV）引发的致死性人畜共患传染病,迄今为止该疾病尚无有效的治疗措施及抗病毒药物,若在暴露前或暴露后及时注射疫苗,狂犬病的发病率将大大降低,从而达到有效预防的目的。狂犬病疫苗接种后机体可产生RABV中和抗体（rabies virus neutralizing antibody,RVNA）,其滴度是评价疫苗免疫效果的重要指标。传统的RVNA检测方法存
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狂犬病是由狂犬病病毒（rabies virus,RABV）引发的致死性人畜共患传染病,迄今为止该疾病尚无有效的治疗措施及抗病毒药物,若在暴露前或暴露后及时注射疫苗,狂犬病的发病率将大大降低,从而达到有效预防的目的。狂犬病疫苗接种后机体可产生RABV中和抗体（rabies virus neutralizing antibody,RVNA）,其滴度是评价疫苗免疫效果的重要指标。传统的RVNA检测方法存在试验周期长、使用高致病性活病毒等弊端,不便于大规模推广。为了避免试验中涉及活病毒操作,更安全、准确监测针对我国现用人狂犬病疫苗生产用RABV固定毒a G株的RVNA水平,本研究基于HIV慢病毒包装系统制备了RABV a G株假病毒,并将其应用于免疫狂犬病疫苗血清中和抗体水平的检测。本研究通过构建编码RABV a G株G蛋白的重组真核表达质粒p CMV-a G-G,将G蛋白表达质粒与假病毒包装质粒及绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）指示质粒共转染293T细胞进行假病毒的包装,分别在蛋白表达水平与细胞感染性等方面对RABV a G株假病毒进行鉴定。通过优化假病毒包装过程中的质粒与转染试剂比例及收毒时间等关键要素,成功制备了具有较高滴度的RABV a G株假病毒,其病毒滴度可达到105.5TCID50/m L。为验证制备的假病毒是否具有与血清中和抗体结合的能力,分别用阳性和阴性血清对假病毒进行初步中和实验,其中阳性血清对假病毒的感染有抑制作用,而阴性血清并无抑制作用。假病毒接种量与感染细胞形成的荧光斑点数之间存在良好的线性关系,血清样本的滴度可通过假病毒荧光斑点数减少50%时对应的血清稀释倍数来进行计算。通过对假病毒血清中和试验的检测时间及假病毒接种量等条件的筛选与优化,初步建立了RABV a G株假病毒中和抗体检测方法,并用于阳性血清中和滴度的测定。综上所述,本研究基于HIV慢病毒包装系统成功制备了携带GFP报告基因与a G株G蛋白的RABV假病毒,其具有与阳性血清中和抗体结合的能力,可初步应用于狂犬病疫苗免疫血清中和效价水平的测定,为进一步完善中和抗体效价的检测方法提供了可能。
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