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目的：1．研究骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells，BMMNCs）的体外分离、标记及鉴定方法。2．建立犬急性心肌梗死模型并观察梗死后心室重构的变化。3．研究BMMNCs移植后梗死心脏形态、结构及功能的变化。4．研究BMMNCs移植后梗死心脏胶原及基质金属蛋白酶等相关分子基因的变化，探讨细胞移植影响梗死后心室重构的分子机制。方法：1．应用Ficoll法分离BMMNCs，台盼蓝染色检测其活性，瑞氏染色行形态学观察，用DAPI标记行荧光观察，用流式细胞仪检测CD34阳性细胞的含量，细胞培养传代观察。2．采用改良开胸冠脉结扎法建立犬急性心肌梗死模型，用超声心动图（UCG）连续观察心脏形态及功能变化，心肌核素扫描观察心肌灌注，6周后处死行心脏大体形态及组织病理学观察。3．成年犬24只随机分4组：急性心梗对照组及移植组（心梗后1h），陈旧心梗对照组及移植组（心梗后4w）。心肌直接注射法行自体BMMNCs移植，UCG观察心脏形态及功能变化，行心脏大体形态、荧光及组织病理学观察。4．BMMNCs移植后取心肌标本，用羟脯氨酸法检测心肌中胶原含量，用RT-PCR方法检测心肌中Ⅰ和Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶2和9（MMP-2、-9）、基质金属蛋白酶抑制因子1和2（TIMP-1、-2）、转化生长因子β1（TGF-β1）及血管内皮生长因子（VEGF）的mRNA表达；心肌组织中抽提核蛋白用Western Blot方法检测NF-κB的表达。结果：1．用Ficoll分离法可分离得到5～12×107个BMMNCs，台盼蓝染色拒染率95％，形态为均一大小的单个核细胞，DAPI荧光标记率95％以上，流式细胞仪检测CD34+细胞占1.8±0.28％；细胞培养后1周形成克隆性集落。2．犬心梗模型早期均表现出典型的心肌缺血改变，后期行UCG、核素扫描及大体、组织病理观察均见明显的心肌梗死区，室壁瘤发生率69.2％，模型成功率92.8％；UCG还显示心梗后左室内径及容积逐渐扩大，室间隔及左室后壁逐渐增厚。3．BMMNCs移植后UCG检查表明，左室舒张末径及容积、室间隔及左室后壁厚度均降低；陈旧心梗期细胞移植后EF值及FS值升高。大体形态学观察可见细胞移植后梗死区厚度增加，而梗死区长径减小；急性心梗移植后无室壁瘤发生，而陈旧心梗移植组长轴短轴之比增加。细胞移植后在移植细胞区均观察到荧光表达，但多数核形态不规则，未观察到发荧光的成熟心肌细胞核形态。组织学观察见细胞移植后有较多新生毛细血管生成，急性心梗移植组还伴有较多淋巴细胞浸润。4．BMMNCs移植后心肌胶原含量减少。RT-PCR检测发现细胞移植后以Ⅰ型胶原mRNA降低为主；同时心梗区及心梗周围区MMP-2、-9及TGF-β1 mRNA亦降低，而TIMP-1、-2 mRNA增高；急性心梗期细胞移植后VEGFmRNA水平普遍升高，而陈旧心梗移植后仅在心梗周围区表现出升高；westernblot检测发现BMMNCs移植后心梗区及心梗周围区NF-κB水平均降低。结论1．用Ficoll分离法可获得足够数量的犬BMMNCs，经DAPI荧光标记后亮度稳定；经鉴定含主要干细胞成分HSCs和MSCs，可作为供体细胞移植。2．改良结扎法建立的犬心梗模型形成了透壁性心梗及室壁瘤样改变，具有典型的梗死后心室重构变化，为梗死后重构研究提供了可靠的动物模型。3．BMMNCs移植在急性或陈旧心梗期均发挥了有益的作用，在形态和结构上抑制了心室重构的发展，同时促进了血管新生，从而改善了心功能。4．BMMNCs移植抑制了心肌胶原的合成，相关基因MMPs、TGF-β1，上调及TIMPs、VEGF上调及核蛋白NF-κB降低，这些变化共同参与了细胞移植对梗死后心室重构的抑制作用，且主要通过影响基质重构及血管重构起作用。